产品名称:猪附红细胞体(SEP)核酸检测试剂盒
英文名称:Eperythrozoon Suis (SEP) Nucleic Acid Detection Kit
货号:YS-P015407
分类:核酸检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
一步法反转录荧光 PCR,附红细胞体为原核生物,提取全血中游离与细胞内 SEP 基因组 DNA,特异性引物靶向 16S rRNA 基因,扩增过程探针裂解释放荧光,检测血液低载量感染样本。
核酸杂交显色原理,扩增产物滴加至固相膜条,膜上固定 SEP 特异性寡核苷酸探针,碱基互补配对后结合显色底物,出现清晰显色条带判定阳性,适配基层简易实验室。
内参校正型 qPCR 原理,以猪 β-actin 基因作为样本内参,同步扩增 SEP 靶基因与宿主内参,校正血液样本溶血、血红蛋白对扩增的抑制,降低漏检概率。
实验流程:
样本处理(样本处理区)
推荐使用磁珠法或离心柱法提取核酸,避免交叉污染。
试剂配制(试剂准备区)
反应体系(20μL/管):19μL反应液 + 1μL酶液,分装后加入5μL待测核酸或质控品。
PCR扩增(核酸扩增区)
循环参数:
预变性:95℃ 2min(1循环);
扩增:95℃ 15sec → 60℃ 30sec(45循环,60℃时采集荧光信号,FAM通道)。
结果分析
阳性:Ct值≤40,扩增曲线呈指数增长;
阴性:无Ct值或曲线平直;
可疑:40<Ct≤45,需复测确认。
质控要求:阳性质控Ct≤32,阴性质控无扩增。
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注意事项:
所有耗材必须无核酸酶,吸头一次性使用,禁止重复吸取;
阳性模板拷贝浓度高,开盖操作轻柔,避免气溶胶扩散造成全域污染;
试剂融化后冰上放置不超过 2 h,用完立即放回 - 20℃;
废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃;
试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测,禁止人体临床检测;
移液器、操作台定期紫外消毒,长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。
关键字: 猪附红细胞体;SEP;核酸检测试剂;
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