产品名称:猪蓝耳病病毒经典型(PRRSV-C)核酸检测试剂盒
英文名称:Classical Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV-C) Nucleic Acid Detection Kit
货号:YS-P015428
分类:核酸检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
经典株 ORF5 特异性探针 RT-qPCR,经典株 ORF5 基因序列与高致病株存在多处碱基差异,特异性探针仅识别经典毒株核酸产生荧光。
分型特异性巢式 RT-PCR,通用蓝耳引物首轮扩增,经典株特异性引物第二轮扩增,凝胶条带阳性判定经典型 PRRSV。
竞争内标定量 RT-PCR,通过内标校正病毒载量,定量血清中经典蓝耳病毒拷贝数,监测免疫猪排毒情况。
实验流程:
1. DNA提取(样本制备区)
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA,建议浓度≥10 ng/μL,A260/A280比值1.8-2.0。
2. 标准曲线制备(独立操作区)
标记6管为梯度稀释点(如7-2),每管加45 μL DEPC水。
取5 μL阳性对照依次稀释,混匀后作为标准品(避免污染)。
3. PCR反应体系配制(试剂配制区)
按以下比例配制(示例):
| 组分 | 体积(μL) |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上机检测
程序设置:预变性95℃ 3 min;40循环(95℃ 10 s, 60℃ 30 s);熔解曲线分析。
数据分析:根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。
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注意事项:
试剂盒含生物源性质粒模板,操作全程佩戴手套、口罩,阳性模板仅在生物安全柜开盖;
所有一次性耗材、PCR 废液、电泳凝胶实验后 121℃高压灭菌再丢弃;
试剂避免反复冻融,单次融化冰上放置不超过 2 h,使用完毕立即放回 - 20℃;
移液器吸头一次性使用,禁止重复吸取,防止交叉污染;
试剂盒仅用于科研检测,严禁人临床体外诊断;
扩增产物区产物不可带回试剂、提取区,防止气溶胶大面积污染实验室;
若阴性对照持续出现杂带,全部更换全新试剂盒,实验室台面、移液器紫外过夜消毒。
关键字: 猪蓝耳病病毒经典型;PRRSV-C; 核酸检测试剂盒;
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