| 描述 | Daurisoline 是一个 hERG 抑制剂,也是一种自噬抑制剂。 |
|---|
| 相关类别 | 信号通路 >> 自噬 >> 自噬 信号通路 >> 跨膜转运 >> 钾通道 天然产物 >> 生物碱 研究领域 >> 癌症 |
|---|
| 靶点实验 | hERG[1], autophagy[2] |
|---|
| 体外研究 | Daurisoline(化合物1)对+ 20mV的去极化结束(IhERG-步骤)和+ 60mV的峰尾电流(IhERG-尾)显示出最大抑制作用。在浓度为1,3,10和30μM时,去极化结束时电流幅度的抑制率(IhERG-step)为32.2±4.2％,41.6±2.6％,62.1±5.9％和74.8±6.8％ , 分别; IC50为9.1μM。反过来,IhERG尾的抑制率分别为16.7±5.8％,31.1±4.5％,55.1±7.2％和81.2±7.0％; IC50为9.6μM[1]。 Daurisoline(DAS)抑制不同癌细胞系中CPT诱导的自噬,HeLa,A549和HCT-116细胞的IC50分别为74.75±1.03,50.54±1.02和80.81±1.10μM。 DAC和Daurisoline还通过抑制DAC和Daurisoline处理细胞中的溶酶体V型ATP酶活性而损害溶酶体功能和溶酶体酸化[2]。 |
|---|
| 体内研究 | 结果显示静脉内施用Daurisoline(DS)或蝙蝠葛碱(Dau)6mg/kg后血浆浓度呈双指数下降。在比格犬中静脉注射Daurisoline和Dau 6mg/kg后,HR,LVSP,dp/dtmax和SBP降低。但是观察到两种药物的最大药理作用在最大血浆浓度晚10至15分钟达到峰值[3]。 |
|---|
| 激酶实验 | 将HEK293细胞与35μg/ mL Dx-OG514一起温育过夜。洗涤细胞并与无血清的Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM）一起温育2小时。在裂解前15分钟，将FCCP加入培养基中至终浓度为1μM。将细胞在补充有1μMFCCP的级分缓冲液（50mM KCl，90mM K-葡萄糖酸盐，1mM EGTA，50mM葡萄糖，20mM HEPES，蛋白酶抑制剂混合物，pH = 7.4）中刮擦。用针喷雾后，将细胞以10,000rpm旋转15秒。在4°C。然后，以最大速度再次离心上清液另外20分钟。将沉淀重新悬浮在补充有1％BSA的预热的分级缓冲液中，并用DAC，Daurisoline（DAS）或BAF处理分成几个等分试样30分钟。在96孔板中以30秒间隔激发511nm激发530nm处的基线荧光，持续5分钟[2]。 |
|---|
| 细胞实验 | 通过3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物（MTT）测定法测定细胞增殖。将HeLa细胞以每孔7000个细胞接种在96孔板中的DMEM（1％血清）中。在用不同化合物（包括Daurisoline）处理细胞指定的时间后，向每个孔中加入20μLMTT（在PBS中2.5mg / mL）。将板在37℃下再孵育4小时。然后将紫蓝色MTT甲crystals沉淀物溶于100μLDMSO中。通过用酶标仪测量572nm处的光密度来评估HeLa细胞的细胞活力[2]。 |
|---|
| 动物实验 | 用戊巴比妥钠（30mg / kg，静脉注射）麻醉比格犬后，通过右颈总动脉将套管推进左心室。并且套管连接到压力传感器，压力传感器连接到放大器和测谎仪。将右股动脉插入以测量血压波。同时观察ECG（导联II）。静脉注射Daurisoline（DS）（n = 4）或Dau（n = 4）给比格犬后，记录ECG，BP和LVP信号。在给药前和给药后2,5,10,15,20,30,45分钟和1,1.5,2,3,2,6,8小时采集血样[3]。 |
|---|
| 参考文献 | [1]. Liu Q, et al. Effect of daurisoline on HERG channel electrophysiological function and protein expression. J Nat Prod. 2012 Sep 28;75(9):1539-45. [2]. Wu MY, et al. Natural autophagy blockers, dauricine (DAC) and daurisoline (DAS), sensitize cancer cells tocamptothecin-induced toxicity. Oncotarget. 2017 Sep 8;8(44):77673-77684. [3]. Shi SJ, et al. Pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling of daurisoline and dauricine in beagle dogs. Acta Pharmacol Sin. 2003 Oct;24(10):1011-5. |
|---|