猪抗司美格鲁肽抗体(Semaglutide-IgG)ELISA试剂盒-定量
货号:LM8K680P
规格:48T/96T
种属:猪
检测范围：78.125–5000 pg/mL
适用范围: 本试剂盒仅用于科研, 不能用于临床诊断,适用于猪血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及其它生物体液。
检测原理：试剂盒采用间接法原理：将猪(Semaglutide-IgG 重组抗原包被于酶标板上，加入样品，样品中的 IgG 抗体被捕获，结合形成“抗原- IgG 抗体”免疫复合物，清洗去除游离的杂质，再加入 HRP 标记的抗猪 IgG 抗体，形成“抗原-IgG 抗体-酶标抗体”复合物，清洗去除多余的酶标抗体，加入 TMB 显色，再加入终止液，用酶标仪在 450 nm 处测 OD 值，颜色的深浅和样品中的待测抗体的 浓度呈正比。
产品组分：
| 名称 | 组成成分 | 数量（48T） | 数量（96T） |
| 酶标板 | 预包被捕获抗体的酶标板 | 8×6条 | 8×12条 |
| 标准品（10X） | 待测物（5000 pg/mL） | 1 支×100μL | 1 支×200μL |
| 酶标记物（100X） | 100 倍浓缩 HRP 酶标记兔抗人 IgG | 1 支×50μL | 1 支×100μL |
| 通用稀释液（20X） | 样品/校准品/酶标抗体通用稀释液 | 1支×10mL | 1支×15mL |
| 浓缩洗液（20×) | 20倍浓缩洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
| 显色剂 | 过氧化氢、TMB等 | 1支×6mL | 1支×10mL |
| 终止液 | 稀硫酸 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需单独采购通用型组分，请提供对应的组分名称。
需要但未包含的实验材料：
· 蒸馏水或去离子水，一次性离心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套枪头；
· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具；
· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振荡器（如有需要）、离心机、旋涡振荡器等辅助设备；
· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。
试剂的准备及储存：
· 1×洗液的配制：浓缩洗液（20×）如有晶体析出，需在 37℃下加热至晶体全部溶解后使用。 用蒸馏水 1:20 稀释，例如：10mL 浓缩洗涤液加入 190mL 的蒸馏水，混合均匀。
· 1×通用稀释液的配制：用蒸馏水 1:20 稀释，例如：10mL 的 20×浓缩通用稀释液加入 190mL 的蒸馏水，混合均匀。
· 1×酶标记物工作液的配制：100×酶标记物用“1×通用稀释液”按 1:100 倍稀释，例如：10uL 的（100×）酶标记物加入 990uL 的“1×通用稀释液”，混合均匀。配制好的 1×酶标记物工 作液可以在 2~8℃保存 8h。
· 工作校准品的配制：校准品开封前应离心 30 秒，确保所有校准品集中于底部； 准备 7 个离心管，将 10×校准品按需吸取一定量用“1×通用稀释液”稀释 10 倍配制成校准 品 S1。例：50uL 的 10×校准品+450uL 的“1×通用稀释液”，制备得到 500μL 的 S1 浓度校 准品。在随后的 6 个离心管中分别加入 250μL 的“1×通用稀释液”，在这 6 个试管中（S2~S7） 将 S1 校准品依次倍比稀释 6 个梯度至 S7，共配制 7 个浓度的校准品，依次为：S1、S2、S3、 S4、S5、S6、S7，如下图所示，“1×通用稀释液”作为零浓度校准品 S0，共 8 支校准品。
样品采集、预处理及储存：
· 血清：使用血清采集管采集全血，室温静置待血细胞凝集后取的血清，或直接在 1000×g 下离 心 15 分钟取得血清。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血清应及时进行检测，如不能及时 进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过 6 个月，样品冻融 不超过 2 次。
· 血浆：使用 EDTA 或肝素采血管收集血浆。全血采集后以 1000×g 离心 15 分钟取得血浆。操 作应柔和，避免溶血发生。获取的血浆应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多 份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过 6 个月，样品冻融不超过 2 次。
· 组织：组织称重后剪碎，将剪碎的组织加入裂解液，一般按 1:4-1:9 的重量体积比，比如 100mg 的组织样品对应 400uL 的裂解液，具体可根据实验需要适当调整，最后将匀浆液于 5000×g 离 心 5-10 分钟，取上清检测。
· 细胞：取适量细胞，于冰上进行超声破碎，5000×g 离心 5-10 分钟，取上清检测。
· 细胞上清：取细胞上清于 5000×g 离心 5-10 分钟，取上清检测。
实验步骤：
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右，也可置于37℃温箱快速回温至室温。注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。
| 1 | 编号 | 检测试验需设置校准品孔、样品孔，合理规划各样本的排布 |
2 | 稀释加样 | 校准品孔：每孔加入校准品 100uL ，（S0-S7 ，共 8 个浓度）。 样品孔：每孔加入 1×通用稀释液 80uL ，再加入血清样本 20uL 。* 测细胞：每孔加入细胞上清 100uL。 |
3 | 温育 | 盖上封板膜，在 37℃下孵育 60 分钟 |
4 | 洗板 | 洗板 3 次，最后一次洗板后倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍去残液。 |
5 | 加酶 | 每孔加入 1×的 100μL 酶标记物工作液。 |
6 | 温育 | 盖上封板膜，在 37℃下孵育 60 分钟。 |
7 | 洗板 | 洗板 5 次，最后一次洗板后倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍去残液。 |
8 | 显色 | 每孔加入显色剂 100uL ，37℃避光显色 10 分钟。 |
9 | 终止 | 每孔加终止液 50uL。 |
10 | 测定 | 使用酶标仪在选择 450nm 波长进行检测。 |
* 样品稀释液 50uL ，加样品50uL 样品稀释倍数为 2 倍。
* 样品稀释液 80uL ，加样品 20uL ，则稀释倍数为 5 倍。
* 如样本珍贵量少，可适当加大稀释倍数，应当进行预实验确定最佳稀释倍数。
结果判断：
双波长检测结果无需进行调 0 ，可直接进行标曲拟合及结果计算。
以下曲线拟合方式均可使用，选择拟合后 r 值最佳的拟合方式进行结果计算。
四参数逻辑（4-P）曲线拟合：以浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标；
多项式曲线拟合：2 次多项式、3 次多项式；
双对数直线拟合：以浓度值取对数，吸光度值取对数后，进行直线拟合；
点对点拟合：各相邻点之间分别单独进行线性拟合，分段计算；
推荐使用专业化软件进行结果拟合和计算，如 ELISACALC 、SPSS 、Graphpad Prism 等。**最终样本浓度应乘上样本的稀释倍数。曲线拟合方式示例图，以下数据和曲线仅供示例，与本试剂盒测定结果无关。
检测的局限性：
样本浓度超出检测范围上限时，应当进行适当加大稀释倍数后再次检测，计算结果应当乘上稀释倍数。样本浓度低于 LOQ 定量限时，检测结果无法进行准确定量。
产品性能指标：
以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。
灵敏度：56 pg/mL
精密度：板内精密度 CV＜10%（N=20），板间精密度 CV＜15%（N=20）。
特异性（Analytical specificity）：其他相关因子在稀释缓冲液中制备为 10μg/mL 测定，没有观察到明显的交叉反应。
注意事项：
· 试剂盒内所有成分仅供研究使用！
· 终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，应谨慎操作。
· 试剂盒成分含防腐剂、蛋白成分等，可能引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 显色剂、浓缩洗液可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品，实验操作后彻底洗手。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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