产品属性
产品名称 | BF647标记的细胞凋亡诱导蛋白NALP3抗体 | 货号 | YS-K9241 |
英文名称 | NALP3/CIAS1 Rabbit pAb, BF647 conjugated | 用途 | 仅供科研实验 |
商品介绍
英文别名：LRR and PYD domains-containing protein 3; AGTAVPRL; AII/AVP antibody Angiotensin/vasopressin receptor AII/AVP like; Angiotensin/vasopressin receptor AII/AVP-like; C1orf7; Caterpiller protein 1.1; CIAS 1; CIAS1; CLR1.1; Cold autoinflammatory syndrome 1; Cold autoinflammatory syndrome 1 protein; Cryopyrin; Familial cold autoinflammatory syndrome; FCAS; FCU; Muckle-Wells syndrome; MWS; NACHT; NACHT LRR and PYD containing protein 3; NALP 3; NALP3; NALP3_HUMAN; NLRP3; PYPAF 1; PYPAF1 antibody PYRIN containing APAF1 like protein 1; PYRIN-containing APAF1-like protein 1.
靶标：NALP3/NLRP3，炎症小体核心蛋白，介导细胞焦亡、炎症应答
荧光基团：BF647；Ex=647 nm，Em=666 nm
抗体类型：兔多克隆 / 重组单抗
应用：细胞免疫荧光 ICC、组织 IF、流式检测炎症活化水平
种属：人、小鼠、大鼠通用
稀释：IF 1:100–1:500
储存：-20℃避光分装
原理特点
本抗体采用BF647远红光标记，特异性识别NALP3炎症小体核心蛋白，NALP3可感知细胞应激、损伤信号，组装炎症小体，介导下游炎症因子活化与细胞焦亡、炎症反应，是天然免疫与炎症疾病的关键靶点。该抗体特异性强、荧光抗干扰能力优异，可精准定位胞内NALP3蛋白的表达与聚集情况，适配共聚焦成像、炎症细胞定量检测，用于炎症小体活化机制研究。
靶点背景
1. NLRP3 是炎症小体模式识别受体，感知病原体、损伤相关分子模式
2. 组装 NLRP3 炎症小体激活 Caspase-1，诱导 IL-1β 成熟释放，介导炎症焦亡
3. 自身炎症病、代谢炎症、感染免疫、慢性炎症机制研究关键靶点
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样本处理与实验操作
1. Western Blot（免疫印迹）
样本制备
细胞样本：PBS洗涤2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30分钟，12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量蛋白浓度
组织样本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，离心后取上清，调整蛋白浓度至一致
变性处理：加入5×SDS上样缓冲液，95℃加热5-10分钟，冷却后上样
抗体孵育
转膜完成后，用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时
一抗稀释后4℃孵育过夜（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中
TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟；加入二抗（1:5000-1:10000稀释）室温孵育1-2小时
再次洗涤后，用ECL发光液显影，通过凝胶成像系统采集图像
2. IHC-P（石蜡切片免疫组化）
样本前处理
脱蜡水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分钟）、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分钟），最后用PBS冲洗
抗原修复：将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，微波炉加热至沸腾，保持10-15分钟，自然冷却至室温
封闭处理：3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟
抗体孵育
一抗稀释后滴加在切片上，4℃孵育过夜；孵育时置于湿盒中，防止液体挥发
次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟；加入二抗（生物素标记）室温孵育30分钟
PBS冲洗后，加入ABC复合物室温孵育30分钟，DAB显色剂显色（显微镜下观察控制时间，通常3-10分钟），苏木素复染后脱水封片
3. ICC/IF（细胞免疫荧光）
样本制备
细胞爬片培养至70-80%汇合度，PBS洗涤2次，4%多聚甲醛固定15-20分钟
通透处理（根据抗体类型选择）：0.1% Triton X-100室温孵育10分钟，PBS冲洗3次
封闭处理：5% BSA室温封闭30-60分钟，减少非特异性结合
抗体孵育
一抗稀释后滴加在爬片上，4℃孵育过夜，或室温孵育1-2小时
PBS冲洗3次，每次5分钟；加入荧光标记二抗（1:200-1:500稀释），室温避光孵育30-60分钟
再次冲洗后，用抗淬灭封片液封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像
4. ELISA（酶联免疫吸附试验）
包被与封闭
用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液pH9.6）稀释抗原至合适浓度，每孔加入100μl，4℃包被过夜
弃去包被液，PBST洗涤3次，每次3分钟；加入封闭液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小时
抗体孵育
一抗按比例稀释后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小时，或4℃孵育过夜
PBST洗涤3次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μl，37℃孵育1小时
洗涤后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光显色10-20分钟，加入终止液（2M H₂SO₄），用酶标仪在450nm波长读取OD值
关键字： BF647标记的细胞凋亡诱导蛋白NALP;NALP3/CIAS1 Rabbit p;100ul;
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