人半胱氨酸双加氧酶Ⅰ(CDO1)重组蛋白 新品

人半胱氨酸双加氧酶Ⅰ(CDO1)重组蛋白可开展 CDO1 催化活性检测、半胱氨酸代谢调控研究、氧化应激相关机制分析、小分子调节剂筛选与抗体制备鉴定。

型号：YS-DB2157

产品名称：人半胱氨酸双加氧酶Ⅰ(CDO1)重组蛋白

物种：Homo sapiens (Human，人)

英文名称：Recombinant Cysteine Dioxygenase I (CDO1)

酶与激酶

物种：Homo sapiens (Human，人)

来源：原核表达

宿主E.coli

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)

亚细胞定位：：n/a

预测分子量：26.8kDa

实际分子量：-(差异分析请参阅说明书)

片段与标签：Met1~Asn200 with

缓冲液成份：磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性状：冻干粉

纯度：> 95%

等电点：6.5

应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

规格10μg50μg200μg1mg5mg
检测原理：

SDS-PAGE 灰度纯度定量：电泳分离蛋白，条带灰度积分计算目标蛋白纯度，判断纯化工艺达标情况。

BCA 法精准浓度测定：蛋白还原铜离子显色反应，线性标准曲线准确定量重组蛋白终浓度。

双加氧酶催化活性检测：CDO1 催化半胱氨酸氧化为半胱氨酸亚磺酸，高效液相色谱检测底物消耗与产物生成量，计算比酶活。

ELISA 宿主 DNA 残留检测：特异性探针定量大肠杆菌基因组 DNA 残留，避免核酸杂质干扰下游细胞功能实验。
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使用方法：

1. 蛋白复溶

解冻：从低温冰箱取出蛋白后，立即置于冰上缓慢解冻，避免室温放置导致蛋白变性。

缓冲液选择：根据蛋白特性选择合适的复溶缓冲液，常用基础缓冲液为10-50mM Tris-HCl（pH7.0-8.0）或PBS（pH7.2-7.4）；部分蛋白需添加100-300mM NaCl维持渗透压，或添加1-5mM DTT、β-巯基乙醇等还原剂保持蛋白稳定性。

复溶操作：根据蛋白浓度，加入适量缓冲液使终浓度达到0.1-1.0mg/mL（部分难溶蛋白可适当调整浓度）；轻轻颠倒离心管或用移液器缓慢吹打混匀，避免剧烈震荡；置于冰上静置10-30分钟，期间可轻柔混匀2-3次，确保蛋白充分溶解。

2. 活性测定（以酶类蛋白为例）

试剂准备：根据酶的催化特性，配制相应的底物溶液、辅助因子溶液、反应缓冲液等；确保所有试剂均为分析纯以上级别，且在有效期内。

反应体系优化：通过预实验确定酶的最适反应温度、pH值、底物浓度、酶浓度等参数；通常反应体系体积为50-200μL，酶浓度需根据活性高低调整。

检测操作：按照优化后的反应体系依次加入试剂，启动反应后，通过分光光度法、荧光法、比色法等检测方法，实时或终点检测底物消耗、产物生成的信号变化。

活性计算：根据检测到的信号变化值，结合摩尔消光系数、荧光量子产率等参数，计算酶的活性单位（U）；1U定义为在特定条件下，每分钟催化1μmol底物转化为产物的酶量。

3. Western Blot检测

样品处理：取适量复溶后的蛋白溶液，加入等体积的2×SDS上样缓冲液，沸水浴加热5-10分钟使蛋白变性；若蛋白含二硫键，可添加β-巯基乙醇或DTT辅助变性。

电泳分离：将变性后的样品加入SDS-PAGE凝胶的上样孔，同时加入蛋白Marker；先以80V电压运行浓缩胶（约30分钟），待样品进入分离胶后，调整电压至120V继续电泳（约60-90分钟），直至蛋白Marker分离清晰。

转膜操作：根据蛋白分子量选择合适孔径的PVDF或NC膜；采用湿转或半干转法将凝胶中的蛋白转移至膜上，湿转条件通常为200-300mA电流，转膜时间60-120分钟；转膜后可通过丽春红染色确认转膜效果。

封闭与孵育：用5%脱脂牛奶或BSA溶液封闭膜1-2小时，封闭非特异性结合位点；加入一抗（按说明书推荐比例稀释），4℃孵育过夜；次日用TBST缓冲液洗膜3次，每次10分钟；加入HRP标记的二抗（按说明书推荐比例稀释），室温孵育1小时；再次用TBST缓冲液洗膜3次，每次10分钟。

显色检测：将膜浸入ECL化学发光试剂中，避光孵育1-5分钟；使用化学发光成像系统曝光检测蛋白条带，根据条带位置和灰度分析蛋白表达情况。