NAD激酶(NADK)测试盒
产品介绍：
NADK（EC 2.7.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。
测定原理：
NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH；NADPH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT)，通过在600 nm下测定MTT的还原速度（吸光值的变化)可反映出NADK活性的大小。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
产品名称 | NAD激酶(NADK)测试盒 |
规格 | 100管/48样、50管/24样 |
检测方法 | 微量法、可见分光光度法 |
分类 | 辅酶Ⅰ系列 |
货号 | YSH3230 |
检测原理：
NAD 激酶以 ATP 为磷酸供体，催化 NAD 发生磷酸化，生成 NADP。
产物 NADP 可被偶联的葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶体系还原生成 NADPH。
NADPH 在 340 nm 有吸收峰；吸光度上升速率与 NADP 生成量成正比。
通过监测 340nm 吸光度升高速度得到 NAD 生成 NADP 的速率，换算 NAD‑激酶活性。
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操作步骤：
标准曲线绘制：
取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。
每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。
加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。
立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
样本检测：
取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。
加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。
立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。
微量酶标仪法操作步骤
加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。
反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。
终止：每孔加入50μL终止液。
读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。
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