| 描述 | PF-562271 是有效,可逆,ATP竞争性的 FAK 和 Pyk2 激酶抑制剂,IC50 分别为 1.5 和 13 nM。 |
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| 相关类别 | 信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> FAK 信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> PYK2 研究领域 >> 癌症 |
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| 靶点实验 | IC50: 1.5 nM (FAK), 13 nM (Pyk2), 30 nM (CDK2), 47 nM (CDK3), 58 nM (CDK1), 97 nM (CDK7), 97 nM (Flt3)[1] |
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| 体外研究 | PF-562271在重组酶测定中显示为CDK2/E,CDK5/p35,CDK1/B和CDK3/E的30-120nM抑制剂,在基于细胞的测定中评估CDK的作用,48-需要小时暴露3.3μMPF-562271以改变细胞周期进程。 PF-562271在诱导型细胞分析中有效,可测量磷酸化FAK,IC50为5 nM [1]。 PF-562271,FAK和富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(PYK2)的选择性抑制剂,FAK相关家族成员,对尤文肉瘤细胞系中的细胞生长和集落形成。使用2倍连续稀释,使用PF-562271在一系列浓度下处理7个细胞系5天。用PF-562271处理在所有细胞系中都具有细胞活力,处理3天后平均IC50为2.4μM。 TC32和A673是2种最敏感的细胞系,IC50浓度分别为2.1和1.7μM[2]。 |
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| 体内研究 | 在给予荷瘤小鼠后,PF-562271以剂量依赖性方式抑制体内FAK磷酸化(计算的EC50为93ng/mL,总计)[1]。接受PF-562271的大鼠在治疗2周后显示肿瘤生长减少,骨质愈合的迹象表明,新骨(皮质和松质骨)在先前被肿瘤损伤的部位沉积[3]。 |
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| 激酶实验 | 纯化活化的FAK激酶结构域（氨基酸410-689）与50μMATP和10μg/孔的Glu和Tyr，p（Glu / Tyr）的随机肽聚合物在激酶缓冲液（50mM HEPES pH）中反应7.5,125mM NaCl和48mM MgCl 2）15分钟。用浓度为1μM的浓度为1/2-Log的连续稀释的化合物攻击p（Glu / Tyr）的磷酸化。每种浓度一式三份进行测试。用普通的抗磷酸酪氨酸（PY20）抗体，然后用辣根过氧化物酶（HRP）缀合的山羊抗小鼠IgG抗体检测p（Glu / Tyr）的磷酸化。加入HRP底物，加入终止溶液（2M H 2 SO 4）后得到450nm处的吸光度读数。 IC50值使用Hill-Slope模型[1]确定。 |
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| 细胞实验 | 将尤文肉瘤细胞置于10-cm培养皿中，使其粘附24小时，然后用PF-562271，PD0325901或达沙替尼处理。使用CellTiter-Glo发光细胞存活力测定法测量ATP含量作为细胞数的替代物。使用FLUOstar Omega酶标仪获得发光读数。对于小分子治疗的实验，在每个孔中接种1.25×103尤文肉瘤细胞并用一系列浓度处理。使用GraphPad Prism 5.0中的对数转换的标准化数据，从处理3天后获得的ATP测量值计算IC 50值。细胞系也用化合物在6-cm培养皿中处理，胰蛋白酶消化，并使用台盼蓝排除法通过光学显微镜计数。对于使用shRNA转导细胞的实验，在转导后第3天，每孔将1.25×103个细胞接种到384孔板中。 ATP含量在转导后第3天，第6天和第8天测量[2]。 |
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| 动物实验 | 小鼠[1]无胸腺雌性小鼠（CD-1 Nu / Nu，~20克）用于所有体内研究。将指数生长的细胞用胰蛋白酶消化并重悬于无菌PBS中，并将sc（每只小鼠1×10 6个细胞，200μL）接种到小鼠的右侧腹中。将携带150mm 3大小肿瘤的动物分成接受载体（5％Gelucire）或PF-562,271（在载体中稀释）的组，并通过灌胃给药。每2天获得动物体重和肿瘤测量值。用游标卡尺测量肿瘤体积（mm 3）并使用下式计算：长度（mm）×宽度（mm）×宽度（mm）×0.5。生长抑制百分比。对于所有肿瘤生长抑制实验，使用每剂量组8至10只小鼠。 Student's t检验用于确定P值。使用大鼠[3] Nude（Crl：NIH-rnu）雌性大鼠。 PF-562271配制用于使用0.5％甲基纤维素进行口服给药。在给药的第一天，大鼠通过口服强饲法接受单剂量的PF-562271（10mg / kg）。基于给药后1小时的暴露水平，剂量降至5mg / kg。从第二天开始，通过口服强饲法每天给大鼠施用5mg / kg，持续28天。在肿瘤接种后2周开始给药，并且仅在通过放射线照相确认肿瘤存在之后开始给药。在研究过程中确认了测试化合物在血清中的存在。 |
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| 参考文献 | [1]. Roberts WG, et al. Antitumor activity and pharmacology of a selective focal adhesion kinase inhibitor, PF-562,271. Cancer Res, 2008, 68(6), 1935-1944. [2]. Crompton BD, et al. High-throughput tyrosine kinase activity profiling identifies FAK as a candidate therapeutic target in Ewing sarcoma. Cancer Res. 2013 May 1;73(9):2873-83. [3]. Bagi CM, et al. Dual focal adhesion kinase/Pyk2 inhibitor has positive effects on bone tumors: implications for bone metastases. Cancer. 2008 May 15;112(10):2313-21. |
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