线粒体分离和线粒体酶提取测试盒

线粒体分离和线粒体酶提取测试盒

产品介绍：

线粒体是半自主性细胞器，不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要场所，为细胞的活动提供能量，而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此，准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。

测定原理：

利用专门试剂温和匀浆组织和细胞，再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体；利用专门试剂，配合超声波破碎线粒体，可以得到保持活性的线粒体酶。

需自备的仪器和用品：

超声波破碎仪、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

差速离心分离原理：利用线粒体、细胞核、胞质、溶酶体沉降系数差异；先低速离心沉淀细胞核碎片，再中速离心沉淀线粒体组分，实现线粒体富集。

等渗缓冲液保护原理：提取缓冲液维持渗透压平衡，防止线粒体膜吸水破裂；同时添加蛋白酶抑制剂，避免线粒体内部酶被内源蛋白酶降解。

膜通透裂解原理：提取试剂含温和非离子去垢剂，温和通透线粒体外膜与内膜，释放呼吸链等可溶性线粒体酶，同时不过度破坏酶蛋白空间构象。

杂质去除纯化原理：通过洗涤离心步骤去除胞质可溶性蛋白杂质；最终获得的线粒体上清酶液可直接用于后续呼吸链复合体活性测定。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到620nm和510nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

直链淀粉标准曲线：将直链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线

支链淀粉标准曲线：将支链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线样本测定：取0.1mL待测样本，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度