叶绿体分离和叶绿体酶提取测试盒

叶绿体分离和叶绿体酶提取测试盒

产品介绍：

叶绿体是植物细胞内最重要、最普遍的质体，它是进行光合作用的细胞器。叶绿体利用其叶绿素将光能转变为化学能，把 CO2 与水转变为糖。叶绿体是世界上成本最低、创造物质财富最多的生物工厂，准确和全面分离保持正常活性的叶绿体已经成为许多研究的前提。

测定原理

利用专门试剂温和匀浆组织或细胞，再采用差速离心法从匀浆中分离完整叶绿体，可以得到保持活性的叶绿体酶。

需自备的仪器和用品

台式离心机、可调式移液器、匀浆器/研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一：液体 100mL×1 瓶，-20℃保存；

样本的前处理：

① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆，很快研磨或捣碎，30 秒内完成，使之成为匀浆液。

② 将匀浆液于 200g（离心率），4℃离心 1min。

③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，1500g，4℃离心 5min。

④ 弃上清液，于沉淀中加入 0.5mL 试剂一混匀配成叶绿体悬浮液。混匀后测定叶绿体酶活性。

检测原理：

差速离心纯化原理：低速离心去除植物组织残渣、细胞核，中速离心沉淀完整叶绿体，实现叶绿体组分富集分离。

等渗保护缓冲原理：提取缓冲液为甘露醇等渗溶液，维持叶绿体内外渗透压，避免叶绿体被膜破裂造成光合酶提前流失。

温和裂解释放酶原理：低浓度去垢剂温和破裂叶绿体被膜与类囊体膜，释放叶绿体基质酶、类囊体膜结合酶；同时保护酶蛋白活性。

抗氧化保护原理：提取液添加抗氧化剂，抵消植物样本光照产生的活性氧，防止叶绿体酶发生氧化失活，保障提取酶活性完整。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到620nm和510nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

直链淀粉标准曲线：将直链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线

支链淀粉标准曲线：将支链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线样本测定：取0.1mL待测样本，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度