商品属性：
产品名称 | 类黄酮糖基转移酶(UFGT)测试盒 | 货号 | YSH3349 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 检测方法 | 微量法、紫外分光光度法 |
商品介绍：
花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素，属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中，使其呈现由红到紫等不同颜色，是植物主要的呈色物质。
类黄酮糖基转移酶（UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT)是花色苷合成过程的最后一个酶，可以把不稳定的花色素催化成花色苷，在一定范围内，UFGT活性与花色素苷的合成呈现正相关。
测定原理：
UFGT催化UDPG与槲皮素生成UDP；UDP在丙酮酸激酶与乳酸脱氢酶作用下，氧化NADH为NAD+，NAD+生成速度与UDP含量成正比，通过340nm吸光度下降速度反映UFGT活性。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96孔酶标板、研钵、冰和蒸馏水。
检测原理：
糖基转移反应：UFGT催化UDP-葡萄糖与类黄酮底物（如槲皮素）反应，生成糖基化类黄酮产物和UDP
偶联酶法检测：生成的UDP在丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的作用下，氧化NADH为NAD⁺
吸光度测定：通过340nm波长下NADH吸光度的下降速度，间接反映UFGT的活性
生理意义：UFGT是植物花色苷合成途径的关键酶，其活性与花色苷的积累呈正相关
样本前处理方法：
细菌或培养细胞样本收集：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照细菌或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测
组织样本取样：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.05g组织，加入0.5mL提取液），进行冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测
血清/血浆样本
血清(浆)样品：直接检测
土壤样本取样：将样本风干、粉碎、过40目筛，然后称取约0.5g、加入2mL提取液（甲苯）提取：震荡提取20min，12000rpm，4℃，离心20min，取上清待测
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测定操作步骤：
比色法/分光光度法/微量法操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到500nm/550nm，蒸馏水调零试剂配制：
试剂二：临用前加入1.5mL蒸馏水充分溶解备用
试剂三：临用前加入1.5mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：
试剂名称(μL) 空白管 测定管
蒸馏水/样本 100 100
试剂一 700 700
试剂二 100 100
试剂三 100 100
混匀后37℃水浴10min，记录500nm/550nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将PLD标准品稀释成0、1、2、3、4、5U/L系列浓度，同样处理，测定500nm/550nm处的吸光值，绘制标准曲线
ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃
设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度
关键字： 类黄酮糖基转移酶;UFGT;测试盒;
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