乙酰辅酶A羧化酶(ACC)测试盒
产品介绍：
ACC在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
测定原理
ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ATP和无机磷，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。
需自备的仪器和用品
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
产品名称 | 乙酰辅酶A羧化酶(ACC)测试盒 |
规格 | 100管/48样、50管/24样 |
检测方法 | 微量法、可见分光光度法 |
分类 | 脂肪酸代谢系列 |
货号 | YSH3512 |
检测原理：
羧化反应：ACC催化乙酰辅酶A与二氧化碳反应生成丙二酰辅酶A
丙二酰辅酶A检测：丙二酰辅酶A与羟胺反应生成丙二酰羟肟酸，丙二酰羟肟酸在酸性条件下与Fe³⁺反应生成红色复合物
检测波长：在540nm波长下测定红色复合物的吸光度，吸光度与ACC活性正相关
反应条件：最适pH为7.0-7.5，最适温度为37℃
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操作步骤：
比色法/分光光度法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到550nm，蒸馏水调零试剂配制：
试剂二：临用前加入10mL蒸馏水充分乳化备用
试剂三：临用前加入20mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：
试剂名称(μL) 空白管 测定管
蒸馏水/样本 100 100
试剂一 700 700
试剂二 100 100
混匀后37℃水浴30min，立即加入试剂三100μL，摇匀，室温放置10min
记录550nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将油酸标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，同样处理，测定550nm处的吸光值，绘制标准曲线
荧光法操作仪器预热：荧光分光光度计/酶标仪预热30min以上，设置激发波长355nm，发射波长460nm试剂配制：
试剂二：临用前稀释至合适浓度备用样本测定：
试剂名称(μL) 空白管 测定管
蒸馏水/样本 100 100
试剂一 700 700
试剂二 100 100
混匀后37℃水浴10min，立即测定荧光强度F空白和F测定标准曲线绘制：将荧光标准品稀释成0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μmol/L系列浓度，同样处理，测定荧光强度，绘制标准曲线
ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃
设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度
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