脂氧合酶 (LOX)测试盒
产品介绍:
LOX广泛存在于动植物组织中,催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在生物体的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。
测定原理:
LOX催化亚油酸氧化,氧化产物在280nm处有特征吸收峰;测定280nm吸光度增加速率,来计算LOX活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可调式移液枪和蒸馏水。
产品名称 | 脂氧合酶 (LOX)测试盒 |
规格 | 100管/48样、50管/24样 |
检测方法 | 微量法、紫外分光光度法 |
分类 | 脂肪酸代谢系列 |
货号 | YSH3529 |
检测原理:
脂肪酸氧化反应:LOX催化多不饱和脂肪酸(如亚油酸)氧化生成氢过氧化物
检测波长:氢过氧化物在234nm波长下有特征吸收峰,通过测定吸光度变化率计算LOX活性
反应条件:最适pH为7.0-8.0,最适温度为30-37℃
生理意义:LOX参与植物的生长发育、抗逆反应等生理过程,其活性与植物的衰老密切相关
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操作步骤:
操作仪器预热:可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到620nm和510nm,蒸馏水调零标准曲线绘制:
直链淀粉标准曲线:将直链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度,各取0.1mL,加入0.9mL碘试剂,摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值,绘制标准曲线
支链淀粉标准曲线:将支链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度,各取0.1mL,加入0.9mL碘试剂,摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值,绘制标准曲线样本测定:取0.1mL待测样本,加入0.9mL碘试剂,摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值
ELISA法操作试剂准备:将试剂盒从冷藏环境中取出,室温平衡15-30分钟;将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样:
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃
设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加温育:除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)显色:每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min终止:每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算:绘制标准曲线,按曲线方程计算样本浓度
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