大鼠骨保护素配体(OPGL)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔固相化大鼠OPGL特异性抗体，样本中的骨保护素配体抗原可特异性结合包被抗体，经酶标记二抗结合、底物显色后，检测吸光度值，吸光度高低与样本OPGL浓度呈正相关，通过标准曲线精准定量样本中OPGL含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤20pg/mL

检测范围：40pg/mL - 1500pg/mL

反应时间：总反应时长130分钟（样本温育70分钟、酶二抗温育30分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光保存，标准品-20℃分装冻存，避免反复冻融

有效期：未开封有效期6个月，开封后1个月内使用

显色系统：改良TMB显色体系，低背景、高灵敏度

检测波长：450nm/630nm双波长检测

标准曲线绘制：四参数逻辑拟合，曲线拟合度R²≥0.992

特异性：专一结合大鼠OPGL，与OPG、RANK无交叉识别反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：样本采集后尽快检测，细胞因子易降解；洗涤步骤充分，避免非特异性结合
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温放置 30min，梯度稀释 OPGL 标准品，设置酶标板标准梯度孔、大鼠细胞上清待测孔、空白对照孔。

直接加样 100μL 对应标准品与稀释后待测样本至对应孔，空白孔加入等量稀释缓冲液。

密封酶标板，37℃孵育 72min，完成 OPGL 与包被抗体特异性结合。

弃净液体，洗涤液注满每孔静置 34s，重复洗板 5 次，吸水纸吸干孔内余液。

除去空白孔，加入酶联抗体工作液 100μL，避光覆膜 37℃孵育 29min。

加入显色底物 AB 混合液 100μL，轻柔振荡，37℃避光显色 16min。

终止液终止显色反应，15min 内 450nm 测 OD 值，换算样本 OPGL 含量。