本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附法原理，酶标板固相包被大鼠sCD40L特异性捕获抗体，待测样本中的sCD40L抗原可与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合物质后，加入HRP标记检测抗体形成免疫复合物，显色终止后测定吸光度，吸光度数值与样本sCD40L含量成正比，依托标准曲线完成定量检测。
基本参数：
产品名称：大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒
英文名称：sCD40L ELISA Kit
货号：Y-E1521
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度小于1.0 pg/mL
检测范围：2.5 pg/mL - 80 pg/mL
反应时间：全程120分钟（样本孵育60min、酶标孵育30min、显色30min）
保存条件：2-8℃避光干燥保存，禁止冷冻
有效期：未开封原装试剂盒12个月
显色系统：TMB双组分显色液，过氧化物酶催化显色
检测波长：450nm（主波长），630nm（参比波长）
标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制四参数拟合标准曲线，相关系数R²≥0.990
特异性：特异性识别大鼠sCD40L，与大鼠其他同源细胞因子、配体无交叉反应，与人、小鼠同源蛋白交叉反应率＜5%
重复性：板内变异系数CV＜8%，板间变异系数CV＜10%
注意事项：实验所有试剂需提前平衡至室温；避免试剂交叉污染；显色时间需严格把控，避光显色，终止后15分钟内完成上机检测；样本需澄清无溶血、无脂血，溶血样本会干扰检测结果。
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
试剂室温回温 26min，稀释洗涤液，调配酶标记应用液。
标记各孔组别，空白孔加稀释液，标准品、对照、待测稀释样本与酶试剂同步加样。
封板 37℃孵育 62min。
洗板 5 次，浸泡 29s 每次，拍干板条微孔。
显色底物避光反应 13min。
滴加终止液终止显色体系。
酶标仪 450nm 检测数值，定量 sCD40L 蛋白。
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