大鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，酶标板包被大鼠RANKL特异性抗体，待测大鼠样本中的RANKL抗原与固相抗体特异性结合，形成免疫复合物后结合酶标二抗，底物显色终止后检测吸光度，对照标准曲线定量检测样本中RANKL的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.05ng/mL

检测范围：0.1ng/mL～5ng/mL

反应时间：总实验时长100min，样本孵育70min，显色15min，终止读数5min

保存条件：2～8℃干燥避光保存，试剂密封完好，禁止低温冷冻

有效期：原装未拆封6个月，开封后试剂建议2周内使用完毕

显色系统：优化型TMB显色体系，底物稳定，显色梯度均匀

检测波长：450nm单波长检测，可搭配620nm参比校准

标准曲线绘制：采用梯度标准品浓度梯度稀释检测，四参数回归拟合曲线，R²≥0.992

特异性：仅特异性结合大鼠RANKL，对大鼠骨代谢相关同源蛋白无交叉识别，异种属交叉反应极低

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：骨组织、血清样本需充分离心澄清，避免浑浊影响OD值；孵育过程严禁孔板干燥；终止液添加顺序统一，避免误差。
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 33min，稀释 RANKL 冻干标准品做梯度稀释，标记酶标板标准梯度孔、大鼠骨细胞上清待测孔。

直接向对应孔加入标准品、稀释待测样本各 100μL，空白孔加入稀释缓冲液。

封板封口，37℃恒温孵育 72min，完成配体蛋白与固相抗体结合。

弃液洗板，洗涤液浸润每孔 31s，循环洗板 5 次，充分洗脱未结合组分。

所有样品孔加入酶标记特异性抗体 100μL，避光封板孵育 30min。

分加显色 A、B 液各 50μL，轻微震荡后避光显色 15min。

滴加终止液终止酶促反应，酶标仪 450nm 读取吸光度，计算 RANKL 含量。