大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板固定大鼠IKBα特异性抗体，待测大鼠样本中的核因子κB抑制蛋白α抗原与抗体特异性结合，结合酶标记二抗后发生显色反应，吸光度值与样本IKBα浓度正相关，可精准定量检测其含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.06ng/mL

检测范围：0.12ng/mL～7ng/mL

反应时间：总时长90min，37℃孵育60min，显色15min，终止检测5min

保存条件：2～8℃密封避光保存，禁止冻结，防止蛋白试剂失活

有效期：原装6个月，开封后20天内使用

显色系统：高稳定性TMB底物显色系统，显色均匀、梯度分明

检测波长：450nm主波长检测

标准曲线绘制：标准品梯度稀释检测，四参数曲线拟合，R²≥0.991

特异性：特异性结合大鼠IKBα蛋白，与IKBβ、IKBγ亚型无交叉反应

重复性：板内CV≤7.5%，板间CV≤9.5%

注意事项：样本避免高温、反复冻融，防止IKBα蛋白降解；洗涤步骤需充分，去除非特异性结合杂质；显色需避光进行。
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

试剂盒室温回温 35min，倍比稀释 IKBα 标准品，设置酶标板标准孔、大鼠细胞胞浆蛋白待测孔、空白孔。

直接加样：标准孔加梯度标准液 100μL，待测孔加稀释胞浆样本 100μL，空白孔添加稀释缓冲液。

覆膜封板，37℃恒温孵育 83min，捕获抑制蛋白 IKBα 抗原。

倾倒废液，洗涤液浸泡每孔 40s，连续洗板 6 次，去除非特异吸附杂质。

非空白孔加入酶联检测抗体工作液 100μL，避光封板孵育 37min。

依次添加显色 A、B 液各 50μL，轻柔震荡混匀，避光显色 18min。

加入终止液终止显色反应，酶标仪 450nm 读数，计算样本 IKBα 含量。