大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，将抗大鼠pIKBα特异性单克隆抗体固定于酶标板表面，加入梯度浓度标准品及待测大鼠生物样本，样本内的pIKBα抗原与固相抗体发生特异性免疫结合，洗板去除游离成分后，加入酶标记特异性抗体与结合的抗原进一步结合，构建固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，经底物催化显色、终止反应后，通过检测吸光度数值，结合标准品拟合的标准曲线，定量检测样本中pIKBα的表达含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒

英文名称：pIKB伪 ELISA Kit
货号：Y-E1031

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度≤0.05ng/mL

检测范围：0.1ng/mL - 5ng/mL

反应时间：总反应时长150min，分三次温育操作

保存条件：全套试剂2-8℃避光保存，浓缩洗涤液低温防结晶，冻融试剂禁止使用

有效期：未开封有效期6个月

显色系统：TMB底物显色体系，酸性终止液终止反应

检测波长：450nm单波长检测

标准曲线绘制：梯度标准品稀释，测定OD值，采用四参数Logistic拟合绘制标准曲线，精准核算样本含量

特异性：特异性识别大鼠pIKBα磷酸化位点，非磷酸化IKBα无结合反应，无明显交叉干扰

重复性：板内CV＜7%，板间CV＜9%

注意事项：样本采集后需立即液氮冻存，避免磷酸化位点去磷酸化；操作全程无蛋白酶、磷酸酶污染；洗涤步骤充分，避免非特异性吸附
储存与有效期：

未开封整套试剂盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷冻；有效期 12 个月。

开封后保存

剩余酶标板条：自封袋密封，内置干燥剂 2～8℃避光；1 个月内用完。

HRP 酶结合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。

浓缩洗涤液：2～30℃常温保存，结晶温水溶解不影响效果。

复溶后标准品：分装 - 20℃冻存，避免反复冻融，1 个月内使用。

过期试剂禁止使用。
实验步骤如下：

取出预包被微孔板，设定标准孔、样品孔、空白孔，每孔加 45μL 样本稀释液，样品孔再加 5μL 待测大鼠上清液。

所有孔一次性加入酶结合物试剂 110μL，覆膜密封，37℃水浴避光孵育 50min。

手动洗板 5 轮，每轮加满洗涤液浸泡 30s，倒扣在吸水纸上彻底拍净残留液体。

先滴加底物显色液 A 60μL，再垂直滴加底物显色液 B 60μL，避光室温反应 12min。

每孔加入 2M 硫酸终止液 50μL，终止显色反应，横向晃动微孔板 10s 混匀。

酶标仪调至 450nm 波长，5min 内完成整板吸光度检测并记录数据。

用标准曲线回归方程换算待测样本 pIKBα 含量，超出曲线范围样本做稀释复测。
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