本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附法原理,酶标板包被大鼠XCL1特异性捕获抗体,待测样本中的淋巴细胞趋化因子抗原与固相抗体特异性结合,洗涤去除未结合物质后,加入HRP标记检测抗体构建夹心复合物,显色终止后测定吸光度,吸光度值与样本XCL1含量成正比,依托标准曲线完成定量检测。
基本参数:

产品名称:大鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒
英文名称:Lptn/LTN ELISA Kit
货号:Y-E1227
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测浓度小于1.0 pg/mL
检测范围:4 pg/mL - 130 pg/mL
反应时间:全程120分钟(样本孵育60min、酶标孵育30min、显色30min)
保存条件:2-8℃密封避光干燥保存,严禁冷冻
有效期:12个月
显色系统:高灵敏TMB显色体系,适配趋化因子微量检测
检测波长:450nm
标准曲线绘制:六梯度标准浓度拟合,R²≥0.991
特异性:特异性结合大鼠XCL1趋化因子,与其他淋巴细胞趋化因子无交叉反应
重复性:板内CV<7.5%,板间CV<9.5%
注意事项:趋化因子稳定性差,样本需低温保存、快速检测;显色严格避光,防止底物氧化;洗板无残留,降低背景干扰。
通用注意事项:

样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下:

试剂室温回温 27min,稀释洗涤缓冲液,调配酶标记应用液。
标记各孔组别,空白孔不加待测样本,标准品、对照、待测稀释样本与酶液共同加孔。
封板 37℃孵育 64min。
洗板 5 次,浸泡 30s 每次,滤纸拍干残留洗液。
显色底物避光 13min 显色反应。
滴加终止液混匀终止整体体系。
酶标仪 450nm 读数,三项趋化因子指标同步定量。
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