大鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA试剂盒

本试剂盒基于经典双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板固相包被有大鼠MMP-2特异性单克隆抗体。向微孔中依次加入梯度标准品与待测大鼠生物样本，样本内的MMP-2抗原与包被抗体发生特异性免疫结合，洗涤清除未结合杂质后，加入HRP标记的抗大鼠MMP-2抗体，形成特异性免疫夹心复合物。经充分洗涤去除未结合酶标抗体后，加入TMB底物液避光显色，HRP催化底物生成蓝色显色产物，加入终止液终止反应后体系显色稳定。通过检测450nm处吸光度值，结合标准品浓度与对应OD值绘制的标准曲线，即可定量测定大鼠样本中MMP-2的表ᤌ㷄ᤌ
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.05ng/mL

检测范围：0.1ng/mL - 10ng/mL

反应时间：总反应时长110min（样本孵育50min、酶结合物孵育30min、避光显色30min）

保存条件：2-8℃避光干燥冷藏，浓缩洗涤液低温静置如有结晶，温水溶解后使用

有效期：未开封原装试剂盒12个月

显色系统：TMB单一底物显色系统，酸性终止液终止反应

检测波长：450nm

标准曲线绘制：梯度稀释标准品，测定各浓度OD值，四参数拟合标准曲线，线性相关系数R²≥0.990

特异性：仅特异性结合大鼠MMP-2，与MMP-3、MMP-9等亚型及其他基质蛋白无交叉反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：样本需离心去除杂质，避免浑浊影响吸光度；终止液加入顺序、时间需一致；试剂盒不同批次试剂不可混用
关键注意事项：

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异

所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）

避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用

洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果

显色过程需避光，避免阳光直射影响结果

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实验操作流程：

试剂盒所有组分放置室温复温 25min，按配比浓缩洗涤液与纯水配成工作洗涤液，拆分酶标板所需条板。

划定空白、标准、样品三组反应孔，标准品孔加入倍比稀释 MMP-2 标准品 50μL，样本孔上样预处理血清 / 组织上清样本 50μL，空白孔补稀释缓冲液。

全部孔位添加酶偶联抗体工作液 100μL，封板封口，37℃水浴箱避光孵育 55min。

倾倒孔中废液，每孔注满洗涤液静置 25s，倒扣拍净液体，循环洗板 4 次，彻底去除未结合杂质。

每孔先后加入显色底物 A、B 试剂各 50μL，避光环境下 37℃反应 12min。

加入终止溶液 50μL 终止酶促显色，水平轻晃酶标板 30s 充分混匀。

酶标仪 450nm 测定吸光度，拟合标准曲线换算样本内 MMP-2/Gelatinase A 含量。