大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将纯化的大鼠P-PKC特异性抗体包被于酶标板微孔中，形成固相抗体，向微孔中加入标准品、待测大鼠样本，样本中的P-PKC抗原可与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂质后，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，形成抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物，再次洗涤后加入底物显色液进行显色反应，在酸性终止液作用下终止反应，最终通过酶标仪测定特定波长下的吸光度值，吸光度值与样本中P-PKC含量呈正相关，依据标准曲线即可精准计算出样本中P-PKC的浓度。
基本参数‌：

产品名称：大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒

英文名称：P-PKC ELISA Kit
货号：Y-E1142

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度≤0.1ng/mL

检测范围：0.25ng/mL - 8ng/mL

反应时间：总反应时长120min（温育两步法）

保存条件：试剂盒未开封2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后试剂密封2-8℃存放

有效期：未开封有效期6个月

显色系统：TMB双组分显色液，过氧化物酶催化显色

检测波长：450nm（主波长）、630nm（参比波长）

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制四参数拟合标准曲线，计算样本浓度

特异性：与大鼠PKC、磷酸化同源蛋白无交叉反应，与小鼠、兔同源蛋白交叉反应率＜5%

重复性：板内变异系数CV＜8%，板间变异系数CV＜10%

注意事项：全程避免高温强光，磷酸化蛋白易降解，样本需低温快速处理；温育温度严格控制37℃，避免温差影响结果；显色时间需统一，避免过显色或显色不足
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。
实验步骤如下：

包被板每孔加入 50μL 梯度稀释 P-PKC 标准品与待测样本，空白孔加等量样本稀释液，封板膜封板。

每孔直接加入 100μL 酶标检测工作液，震荡混匀 30 秒，37℃恒温孵育 65min。

弃去孔内全部液体，每孔注满浓缩洗涤液静置 20s 后拍干，重复洗板 4 次。

依次加入显色 A 液 50μL、显色 B 液 50μL，避光轻柔混匀，室温显色 18min。

每孔快速加入 50μL 终止液终止酶促反应，轻晃微孔板混匀。

擦净板底外壁水渍，酶标仪设置 450nm 单波长读取各孔 OD 吸光度数值。

依据标准品浓度与对应 OD 值绘制标准曲线，代入样本 OD 计算样本 P-PKC 实际浓度。
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