大鼠基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA试剂盒

本试剂盒采用特异性双抗体夹心ELISA原理，酶标板微孔预先固定纯化的大鼠MMP-4捕获抗体。孵育过程中，标准品及待测大鼠样本中的MMP-4抗原与固相捕获抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质后，加入酶标记检测抗体与抗原结合，形成稳定的免疫复合物。随后加入底物显色体系，在辣根过氧化物酶作用下发生显色反应，终止反应后测定450nm吸光度。根据标准品的浓度梯度与对应OD值构建标准曲线，即可准确计算出待测大鼠样本中MMP-4蛋白的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.1ng/mL

检测范围：0.2ng/mL - 7.5ng/mL

反应时间：总反应时长130min（样本孵育70min、酶孵育30min、显色30min）

保存条件：2-8℃避光冷藏，洗涤液、底物液分开存放，防止污染

有效期：原装未开封12个月

显色系统：优化型TMB显色系统，显色均匀稳定

检测波长：450nm

标准曲线绘制：梯度标准品上机检测，以浓度-OD值拟合标准曲线，R²≥0.990

特异性：特异性结合大鼠MMP-4，与MMP家族其他亚型无交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤11%

注意事项：孵育过程需密封保湿，避免孔内液体蒸发；废弃试剂按生物危险品规范处理
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒常温平衡 32min，配制洗涤工作液，逐级稀释 MMP-4 冻干标准品，分装酶标板条备用。

区分空白、标品、样本孔，标品孔加对应浓度标准品 50μL，样本孔上样待测液 50μL，空白孔加稀释液。

每孔加入酶结合物 100μL，密封酶标板，37℃孵育 65min。

洗板操作：弃液→注满洗涤液静置 30s→甩干，重复 5 轮，板孔倒扣拍干余液。

避光加入显色 A、B 液各 50μL，37℃避光孵育显色 16min。

加入终止液 50μL 混匀终止反应。

酶标仪 450nm 读数，绘制标准曲线计算样本 MMP-4 含量。