大鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，酶标板微孔固相包被大鼠TIMP-1特异性抗体，用于特异性捕获样本中的TIMP-1抗原。加入梯度标准品和待测大鼠样本孵育后，抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质，再加入HRP标记的TIMP-1检测抗体，形成稳定免疫复合物。经显色、终止反应后检测吸光度，OD值与TIMP-1浓度呈正相关，通过标准曲线可精准测定大鼠样本中TIMP-1的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.05ng/mL

检测范围：0.1ng/mL - 11ng/mL

反应时间：总反应时长120min（样本孵育60min、二抗孵育30min、显色30min）

保存条件：2-8℃避光干燥保存，开封试剂密封存放，防止挥发污染

有效期：原装未开封12个月

显色系统：TMB底物显色，硫酸终止体系

检测波长：450nm

标准曲线绘制：6点梯度标准品检测，四参数拟合标准曲线，用于样本定量分析

特异性：特异性结合大鼠TIMP-1，与TIMP家族其他亚型无交叉反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：孵育温度严格控制在37℃，温度偏差会影响抗原抗体结合效率
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温复温 29min，配制洗涤液，溶解 TIMP-1 冻干标准品并做梯度稀释，取用酶标板条。

标准孔依次加梯度标品 50μL，样本孔上样待测样本 50μL，空白孔加入样本稀释液。

每孔添加酶偶联工作液 100μL，覆膜封板，37℃孵育 60min。

弃净孔内液体，洗涤液加满微孔浸泡 30s，洗板 5 次，倒扣拍干板条。

避光加入显色 A、B 液各 50μL，37℃避光显色 15min。

加入终止液 50μL，震荡混匀终止显色。

酶标仪 450nm 读值，标准曲线计算 TIMP-1 浓度。