大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，以包被于酶标板的特异性抗大鼠TIMP-2抗体为固相载体，捕获样本中的TIMP-2抗原。经过孵育结合、洗板净化、酶标抗体结合等步骤后，加入底物进行显色反应，酶催化底物显色的深浅程度与样本中TIMP-2蛋白含量成正比。通过酶标仪测定吸光度，对照标准曲线，可定量检测大鼠生物样本中TIMP-2的表达浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.07ng/mL

检测范围：0.14ng/mL - 10ng/mL

反应时间：总反应时长120min（全程恒温孵育+显色）

保存条件：2-8℃冷藏，浓缩洗涤液低温结晶可温水溶解，不影响使用效果

有效期：12个月（未开封）

显色系统：稳定型TMB显色系统，显色均匀持久

检测波长：450nm

标准曲线绘制：梯度稀释标准品，测定吸光度，四参数Logistic拟合曲线

特异性：高特异性识别大鼠TIMP-2，无家族同源交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：终止液具有腐蚀性，操作时做好防护，避免接触皮肤黏膜
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒常温放置 33min，稀释浓缩洗涤液，倍比稀释 TIMP-2 标准品，固定酶标板使用数量。

空白孔加稀释液，标准孔加梯度标准品 50μL，样本孔加入待测上清 / 血清样本 50μL。

每孔加入酶标记抗体 100μL，密封酶标板，37℃孵育 68min。

洗板 5 次，每次浸泡 33s，弃液后彻底拍干微孔。

避光添加显色底物 A、B 各 50μL，37℃避光显色 19min。

滴加终止液 50μL 终止反应，轻微混匀。

450nm 测定 OD 值，根据标准曲线得到 TIMP-2 检测数值。