大鼠脑红蛋白(NGB)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附原理，酶标板固定抗大鼠NGB特异性抗体，加入标准品和待测大鼠样本，样本中NGB抗原与固相抗体特异性结合，后续结合酶标记检测抗体形成夹心复合物，显色反应后检测吸光度，依据标准曲线测定大鼠样本中NGB的表达含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠脑红蛋白(NGB)ELISA试剂盒

英文名称：NGB ELISA Kit
货号：Y-E1006

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度≤0.07ng/mL

检测范围：0.2ng/mL - 8ng/mL

反应时间：总反应时长120min

保存条件：2-8℃避光密封保存，神经蛋白试剂避光防氧化

有效期：未开封有效期6个月

显色系统：TMB稳定显色体系

检测波长：450nm单波长检测

标准曲线绘制：梯度NGB标准品测值，四参数拟合标准曲线

特异性：特异性识别大鼠脑红蛋白，与血红蛋白、肌红蛋白无交叉反应

重复性：板内CV＜8%，板间CV＜10%

注意事项：脑组织样本快速匀浆、低温离心，防止蛋白氧化降解；实验无氧化污染；洗涤规范，降低背景值
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

微孔板分孔上样梯度标准品 53μL，脑组织匀浆待测样本 53μL，标注分组。

直接加入酶结合试剂 97μL，封板后 37℃避光孵育 55min。

排空孔内液体，洗涤液浸泡 29s，拍干，洗板 5 轮。

避光加入显色底物 AB 液各 50μL，混匀后暗处显色 14min。

终止液 50μL 加入每孔，终止反应并横向摇晃微孔板混匀。

板底清洁后酶标仪 450nm 测定吸光度。

拟合标准曲线得到 NGB 蛋白浓度，异常样本单独复测。
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