大鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫检测原理，酶标板微孔包被大鼠碱性磷酸酶（ALP）特异性抗体，可特异性捕获样本中的ALP蛋白抗原。加入标准品与待测样本孵育结合，洗板去除游离物质后，加入HRP标记的ALP检测抗体，形成稳定免疫复合物。经底物显色、终止反应后检测吸光度，依据标准曲线可精准定量大鼠样本中碱性磷酸酶的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.1U/L

检测范围：0.2U/L - 30U/L

反应时间：总反应时长130min（酶孵育100min、显色30min）

保存条件：2-8℃冷藏，酶试剂禁止震荡、高温，防止失活

有效期：原装未开封12个月

显色系统：碱性磷酸酶专用适配TMB显色系统

检测波长：450nm

标准曲线绘制：梯度酶标准品检测OD值，四参数拟合定量曲线

特异性：特异性识别大鼠ALP，与其他磷酸酶无交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：样本避免溶血，溶血会破坏碱性磷酸酶活性，影响结果
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂室温回温 26min，稀释洗涤浓缩液，梯度稀释 ALP 标准品，裁剪酶标板条。

标准孔加梯度标品 50μL，细胞 / 组织裂解样本孔上样 50μL 稀释样本，空白孔补稀释液。

每孔加入酶偶联工作液 100μL，密封酶标板，37℃孵育 54min。

洗板 4 次，洗液浸泡 25s 每次，弃液拍干微孔。

避光加入显色 A、B 底物各 50μL，37℃避光显色 11min。

终止液 50μL 加入各孔终止显色。

450nm 读 OD 值，标准曲线计算 ALP 含量。