本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理,酶标板包被大鼠vaspin特异性捕获抗体,待测大鼠样本中的vaspin抗原与固相抗体特异性结合,洗除游离成分后加入酶标记二抗形成免疫复合物,底物显色后检测吸光度,依据标准曲线精准定量样本中vaspin的含量。
基本参数:

产品名称:大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)ELISA试剂盒
英文名称:vaspin ELISA Kit
货号:Y-E1125
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测浓度≤0.08ng/mL,可精准检测大鼠脂肪组织、血清中低丰度vaspin蛋白。
检测范围:0.1ng/mL - 15ng/mL,适配大鼠肥胖、代谢模型相关样本的vaspin浓度检测。
反应时间:整体实验耗时95分钟,样本孵育30分钟、酶孵育30分钟、显色20分钟、终止读数15分钟。
保存条件:2-8℃避光冷藏保存,微孔板条开封后密封防潮,洗涤液常温避光辅助存放。
有效期:原装试剂盒有效期6个月,规范存放无试剂失效、活性下降问题。
显色系统:高灵敏度TMB显色系统,酶促反应稳定,底色低,适合微量蛋白检测。
检测波长:450nm主波长检测,630nm波长校正,消除微孔板透光误差。
标准曲线绘制:梯度标准品浓度对应OD值拟合四参数曲线,拟合系数R²≥0.993,定量精度高。
特异性:特异性识别大鼠vaspin蛋白,与其他丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白无交叉反应。
重复性:板内CV≤7%,板间CV≤9%,重复实验数据一致性好。
注意事项:脂肪组织样本需充分匀浆、离心去除油脂,避免干扰抗原抗体结合;所有试剂避免反复冻融。
关键注意事项:

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书,不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存,未用完的试剂需密封后放回规定温度(通常2-8℃或-20℃)
避免试剂污染,不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖,防止出现假阳性结果
显色过程需避光,避免阳光直射影响结果
实验步骤如下:

微孔板每孔加入标准品稀释液 52μL,内脏脂肪组织提取样本 52μL。
直接加入酶标记工作液 99μL,封板孵育,37℃恒温反应 61min。
废液排空,洗涤液浸泡 26s,拍干,连续洗板 4 次。
避光添加显色 AB 液各 50μL,混匀室温显色 16min。
每孔滴入终止液 50μL 终止显色,充分混匀微孔板。
酶标仪 450nm 测定吸光度原始数据。
拟合标准曲线计算 vaspin 蛋白浓度,关联脂肪代谢指标。
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