大鼠内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附原理，固相酶标板固定大鼠visfatin特异性抗体，样本与标准品中的visfatin抗原特异性结合于固相抗体，加入酶标记检测抗体形成夹心免疫复合物，显色反应后检测吸光度，通过标准曲线测定大鼠样本中visfatin的表达水平。
基本参数‌：

产品名称：大鼠内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA试剂盒

英文名称：Rat visfatin ELISA Kit
货号：Y-E1169

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测下限≤0.06ng/mL，可精准检出大鼠血清、脂肪组织中微量visfatin表达。

检测范围：0.08ng/mL - 12ng/mL，覆盖大鼠代谢紊乱、炎症模型样本的visfatin检测区间。

反应时间：全程实验时长90分钟，样本孵育30min、酶结合物孵育30min、显色15min、终止稳定15min。

保存条件：试剂盒整体2-8℃避光冷藏，标准品、抗体浓缩液单独密封保存，严禁冷冻。

有效期：未开封原装有效期6个月，开封后1个月内使用完毕。

显色系统：TMB稳定显色体系，显色均匀、梯度清晰，无背景杂色干扰。

检测波长：检测波长450nm，参比波长600nm，双波长校正提升检测准确度。

标准曲线绘制：四参数Logistic拟合标准曲线，R²≥0.992，高低浓度样本定量准确。

特异性：专一结合大鼠visfatin，与脂联素、瘦素等脂肪因子无交叉反应，特异性良好。

重复性：板内变异系数≤8%，板间变异系数≤10%，实验重复性达标。

注意事项：样本需去除溶血、脂血样本，避免干扰检测结果；孵育温度恒定37℃，严禁温度波动。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

预包被板每孔上样梯度标准品 54μL，大鼠脂肪上清待测样本 54μL，标记分组。

加入酶结合物试剂 96μL，封板密封，37℃孵育 59min。

倒掉孔内液体，洗涤液浸泡 31s，拍干残留液体，洗板 5 次。

避光滴加显色 A、B 液各 50μL，轻震板体，显色 18min。

终止液 50μL 加入每孔，终止反应并混匀体系。

擦拭板底污渍后酶标仪 450nm 读取 OD 值。

计算 visfatin 含量，评估脂肪因子与糖脂代谢关联。
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