大鼠载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，固相酶标板包被大鼠apo-B100特异性抗体，加入大鼠标准品及待测样本，样本中的载脂蛋白B100抗原与固相抗体特异性结合，洗板去除未结合物质，加入酶标记apo-B100检测抗体形成夹心复合物，底物显色后吸光度值与样本中apo-B100浓度呈正相关，结合标准曲线完成精准定量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.18mg/L

检测范围：0.4mg/L - 100mg/L

反应时间：全程120分钟（样本孵育60min，酶标孵育30min，显色30min）

保存条件：2-8℃密封冷藏，严禁冷冻蛋白抗体试剂

有效期：未开封储存有效期12个月

特异性：专一识别大鼠apo-B100，与各类载脂蛋白亚型无交叉干扰

重复性：板内变异系数CV≤5%，板间变异系数CV≤7%

注意事项：避免样本脂蛋白沉淀；试剂混匀无絮状沉淀；实验全程温度稳定
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温回温 30min，稀释洗涤工作液，逐级配制 apo-B100 标准梯度液，酶标板做好孔位标记。

标准品孔加入梯度载脂蛋白 B100 标准品 50μL，样本孔加入 50μL 大鼠血浆样本，空白孔不加液。

非空白孔加入一步法酶偶联物工作液 100μL，封板密封，37℃孵育 52min。

倒去孔内废液，洗涤液浸泡 40s 后甩干，重复洗板 5 次，去除非特异性吸附。

每孔依次加入显色液 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 17min。

逐孔加入终止液 50μL 终止显色，震荡酶标板混匀。

15min 内 450nm 检测读数，标准曲线法定量 apo-B100 浓度。