本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理，酶标板预先包被Nfkbie特异性捕获抗体，样本中的Nfkbie抗原与固相抗体特异性结合，随后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体夹心结构，洗涤去除游离杂质后进行底物显色反应，终止显色后检测吸光度，依托标准曲线精准测定样本中Nfkbie的含量。
基本参数：
产品名称：人B细胞κ 轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(Nfkbie)ELISA试剂盒
英文名称：Nfkbie ELISA Kit
货号：Y-E2576
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度0.15ng/mL，适配核因子类蛋白微量检测
检测范围：0.4ng/mL - 15ng/mL，覆盖人体细胞内Nfkbie常规表达浓度
反应时间：整体反应时长110分钟，核蛋白抗原抗体结合反应充分
保存条件：全部试剂2-8℃恒温避光保存，严禁温差剧烈变化
有效期：原装未开封有效期9个月，开封后1个月内完成检测使用
特异性：专一识别人体Nfkbie蛋白，与NF-κB家族其他抑制因子无交叉反应
重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%，核蛋白检测重复性良好
注意事项：核蛋白提取样本需保证纯度，无胞质杂质污染，孵育温度严格控制37℃，避免温度波动影响结合效率
试剂盒组成：
预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点
辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下：
试剂盒组分室温放置 32min，稀释洗涤液，配制 Nfkbie 梯度标准品，划分酶标板标准、样本、空白孔并编号。
标准孔加 50μL 不同浓度标准品，样本孔上样 50μL 细胞裂解待测样品，空白孔补稀释液，枪头一次性使用防止交叉污染。
每孔加入 100μL 一步法酶标记结合液，封板后 37℃避光孵育 52min。
倒掉孔内液体，洗涤液浸泡洗板 5 次，每次 30s，洗板后充分拍干。
每孔加入 TMB 显色液 90μL，37℃避光显色 17min。
加入终止液 50μL 混匀，终止酶促反应。
酶标仪 450nm 检测 OD 值，拟合标准曲线测算 Nfkbie 含量。
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