大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA) ELISA试剂盒

本试剂盒采用经典双抗体夹心ELISA原理，酶标板预先包被大鼠组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）特异性捕获抗体，待测样本、标准品中的t-PA抗原与固相捕获抗体特异性结合，洗板后加入酶标记检测抗体，形成固相抗体-t-PA抗原-酶标抗体的免疫复合物，催化底物显色后，溶液吸光度高低对应样本中t-PA的含量高低，通过标准曲线拟合计算，可精准定量大鼠样本中t-PA的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出浓度0.08ng/mL，高灵敏度适配大鼠血浆、血管组织中微量t-PA检测。

检测范围：0.1ng/mL - 90ng/mL，适配大鼠凝血、纤溶相关实验的浓度检测需求。

反应时间：总实验时长95分钟，样本孵育40分钟，酶结合物孵育20分钟，避光显色15分钟。

保存条件：试剂全部2-8℃避光保存，严禁冷冻结冰，否则会导致蛋白抗体变性失效。

有效期：未开封有效期12个月，开盖后各试剂组分建议2周内使用完毕。

特异性：特异性结合大鼠t-PA，与尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)无交叉反应，特异性极强。

重复性：板内CV≤5.5%，板间CV≤7.5%，平行样本检测数据一致性高。

注意事项：血浆样本需添加抗凝剂，避免凝血因子影响检测；洗涤过程需充分，减少非特异性结合干扰。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 35min，稀释浓缩洗涤液，做好样本编号与酶标板孔位标记。

梯度稀释标准品，待测血浆 / 组织上清稀释处理，每孔添加 50μL 标准品或待测样本。

一步法直接加入酶标抗体工作液 100μL 至各检测孔，空白孔不加酶液，封板密封。

37℃避光孵育 65min，使固相抗体、样本 t-PA、酶标抗体结合形成免疫复合物。

自动洗板机洗板，每孔洗涤液浸泡 35s，重复洗涤 5 次，拍干板内多余液体。

避光加入显色底物液，每孔 100μL，低速震荡酶标板，37℃显色 18min。

加入终止液终止底物反应，10min 内 450nm 波长读数，绘制标准曲线计算 t-PA 含量。