本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附原理，酶标板微孔固定抗人P27蛋白特异性单克隆抗体，加入标准品、细胞裂解液、组织样本等待测样品，样本中的P27周期蛋白与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入HRP标记的P27检测抗体，形成特异性免疫复合物，经显色、终止反应后检测OD值，通过标准曲线定量测定样本中P27蛋白的表达水平，反映细胞周期调控状态。
基本参数：
产品名称：人P27蛋白(P27)ELISA试剂盒
英文名称：P27 protein Elisa Kit
货号：Y-E224
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测值0.08ng/mL，适配细胞周期调控蛋白微量检测
检测范围：0.16ng/mL - 18ng/mL，覆盖肿瘤、细胞增殖模型样本区间
反应时间：实验总时长90分钟
保存条件：2-8℃冷藏保存，禁止冷冻，防止蛋白变性
有效期：未开封有效期12个月
特异性：专一识别人P27周期蛋白，无同源调控蛋白交叉反应
重复性：板内变异＜6%，板间变异＜7%
注意事项：细胞样本充分裂解，去除沉淀杂质；样本避免反复冻融
关键注意事项：
实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）
避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果
显色过程需避光，避免阳光直射影响结果
实验步骤如下：
实验前将试剂盒所有试剂、待测样本、标准品置于室温环境平衡 30min，配制洗涤缓冲液备用，拆封酶标板并预留所需孔位，剩余板条密封冷藏保存。
设置空白孔、标准品梯度孔、待测样本孔，每孔依次加入对应浓度标准品液、待测样本液，空白孔添加等量样本稀释液，每孔加样量严格统一，封板膜封紧酶标板。
向所有加样孔内直接加入预先稀释完成的酶结合工作液，全程一步添加无需弃去孔内原有液体，轻轻晃动酶标板混匀孔内体系。
封板后放入 37℃恒温孵育箱避光孵育 60min，孵育过程避免酶标板堆叠、温度大幅波动。
孵育结束后撕除封板膜，彻底倾倒孔内全部液体，每孔加满洗涤液浸泡 30s 后甩干，重复洗板 5 次，最后一次洗板后拍干孔内残留液体。
每孔同步加入显色底物 A 液与显色底物 B 液，避光 37℃恒温显色 15min，观察标准品孔出现明显梯度蓝色即可终止反应。
每孔加入终止液终止显色反应，酶标仪调至 450nm 波长，15min 内读取各孔 OD 吸光度值，根据标准品曲线计算样本中 P27 蛋白浓度。
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