人促胰液素/胰泌素(Secretin)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测原理，酶标板预先包被人促胰液素特异性单克隆抗体，样本和标准品中的Secretin抗原与固相抗体特异性结合，孵育结束后洗除游离杂质，加入辣根过氧化物酶标记的抗Secretin抗体，形成免疫复合物，催化底物显色，终止后检测吸光度，根据标准曲线回归方程计算样本中促胰液素的含量。
基本参数‌：

产品名称：人促胰液素/胰泌素(Secretin)ELISA试剂盒

英文名称：Secretin Elisa Kit
货号：Y-E367

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测 5pg/mL

检测范围：12pg/mL - 480pg/mL

反应时间：样本孵育 55min，二抗 30min，显色 14min，总 99min

显色系统：单瓶装即用型 TMB 显色试剂

检测波长：450nm

特异性：与 VIP、胰高血糖素交叉反应率＜2%

重复性：板内 CV＜6.3%，板间 CV＜7.7%

注意事项：血浆样本建议添加抑肽酶防止肽类降解，加样时避免产生气泡影响吸光度
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂室温复温 32min，配制工作洗涤液，拆分酶标板，未使用板条密封置于 2-8℃冷藏保存。

标准品孔加入梯度 Secretin 标准品 50μL，待测样本稀释后加样 50μL，空白对照孔仅添加样本稀释液。

每孔加入酶标记抗体工作液 100μL，封板密封，水平晃动酶标板混匀体系。

37℃恒温孵育 50min，全程避光防止酶标记物失活。

洗板操作重复 4 次，每次浸泡 40s，倒空废液后充分拍干微孔。

避光添加显色液 A、B 各 50μL，混匀后室温避光显色 14min。

加入终止液终止反应，酶标仪 450nm 测定 OD 值，对照标准曲线计算胰泌素含量。
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