人γ肽(Pγ)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理定量检测人样本中的γ肽(Pγ)。微孔板固相表面包被有Pγ特异性捕获抗体，加入待测样本后，样本内的Pγ抗原与固相抗体发生特异性免疫结合，洗板去除未结合的非特异性物质。随后加入HRP标记的Pγ检测抗体，与已结合的抗原形成稳定的夹心免疫复合物，充分洗涤后加入显色底物TMB，经酶促反应产生有色显色产物，反应终止后通过酶标仪检测吸光度。样本中Pγ含量越高，形成的免疫复合物越多，显色越深，吸光度值越高，依据标准曲线可定量测定样本中Pγ的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：≤3pg/mL

检测范围：10pg/mL–1000pg/mL

反应时间：一抗结合 50min，酶标二抗 40min，避光显色 20min

显色系统：TMB 双液显色体系

检测波长：450nm 单波长测定

特异性：不与人其他小分子活性肽发生交叉结合

重复性：板内变异系数≤5.5%，板间变异系数≤7.5%

注意事项：全程避光操作，底物液不可混用，开封试剂 1 周内用完
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

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实验操作流程：

将整套试剂盒置于 22-25℃室温放置 25min 回温，拆封酶标板条，按需拆分板条固定于板架，划分标品孔、样本孔、空白孔。

标准品孔添加已倍比稀释的 Pγ 标准溶液 50μL；检测孔添加预处理后的人体生物样本 50μL；空白孔空置不加液。

直接向除空白孔外所有孔内加入一步法标记抗体工作液 50μL，微量振荡器低速震荡 10s 混匀，覆膜封孔。

置于 37℃水浴恒温孵育 55min，全程保持酶标板水平放置。

揭去封板膜，倒扣酶标板倒掉废液，每孔注满洗涤缓冲液浸泡 35s，强力拍干，循环洗板 4 次。

每孔加入显色底物液 A 50μL、底物液 B 50μL，避光环境下摇匀，37℃避光反应 12min。

滴加终止液 50μL 终止反应，充分混匀后，酶标仪 450nm 测定吸光度，拟合标准曲线换算样本 Pγ 含量。