人弹性蛋白(ELN)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法原理，预先将特异性人弹性蛋白抗体包被于微孔板固相载体上，加入待测样本、标准品后，样本中的人弹性蛋白会与固相抗体特异性结合，洗去未结合杂质后，加入酶标检测抗体形成固相抗体-抗原-酶标抗体夹心免疫复合物，再次洗涤去除游离组分，加入底物液进行显色反应，底物在酶的催化下产生有色产物，终止反应后通过酶标仪测定吸光度值，吸光度高低与样本中人弹性蛋白含量呈正相关，以此实现定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人弹性蛋白(ELN)ELISA试剂盒

英文名称：ELN ELISA Kit
货号：Y-E3000

规格：48T/96T

灵敏度：≤0.15ng/mL

检测范围：0.312ng/mL - 20ng/mL

反应时间：总时长 115min（样本孵育 60min，二抗孵育 30min，显色 15min）

显色系统：TMB 单组份显色液

检测波长：主波长 450nm，参比 630nm

特异性：仅与人 ELN 特异性结合，与同源结构蛋白无交叉反应

重复性：板内 CV＜6.5%，板间 CV＜8.0%

注意事项：样本避免反复冻融，溶血血清不可使用，显色需避光操作
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

取出试剂盒室温平衡 30min，配制洗涤液、样本稀释液与 ELN 标准品梯度稀释液，标记酶标板孔位（空白孔、标准品孔、待测样本孔）。

标准品孔依次加入对应浓度梯度标准品，样本孔加入预处理后待测样本，空白孔加等量样本稀释液，每孔加一步法酶结合工作液，封板膜密封酶标板。

置于 37℃恒温孵育箱避光孵育 60min，使抗原与酶标记抗体充分特异性结合。

撕掉封板膜，弃去孔内全部液体，每孔加满洗涤液静置 30s 后甩干，重复洗板 5 次，拍干酶标板残留液体。

所有孔依次加入显色底物 A 液、显色底物 B 液，轻柔震荡混匀，37℃避光显色 15min。

每孔快速加入终止液终止显色反应，轻晃酶标板混匀液体。

15min 内使用酶标仪在 450nm 波长下读取各孔 OD 值，根据标准品曲线计算样本中 ELN 含量。
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