人蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法原理，微孔板固相载体包被PDIA3特异性捕获抗体，待测样本中的人蛋白二硫化物异构酶A3抗原可与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入酶标检测抗体，形成稳定的夹心免疫复合物，去除游离酶标抗体后加入显色底物，通过酶的催化作用产生显色反应，显色强度与样本中PDIA3含量成正比，结合标准曲线即可精准定量样本中目标蛋白浓度。
基本参数‌：

产品名称：人蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3)ELISA试剂盒

英文名称：PDIA3  Elisa Kit
货号：Y-E962

规格：48T/96T

灵敏度：≤0.06ng/mL

检测范围：0.125ng/mL - 8ng/mL

反应时间：总时长 140min（样本 75min，二抗 45min，显色 20min）

显色系统：增强型 TMB 显色体系

检测波长：450nm

特异性：精准靶向 PDIA3 亚基，不识别 PDI 家族其他亚型

重复性：板内 CV＜5.5%，板间 CV＜7.2%

注意事项：细胞上清样本需离心去除细胞碎片，避免杂质干扰吸光度
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 30min，稀释洗涤液，配制 PDIA3 梯度标准品，酶标板划分空白、标品、样品区域并编号。

对应孔加入标准品、稀释待测样本、空白缓冲液，每孔加入一步法酶偶联抗体液，封板密封。

37℃避光恒温孵育 60min，完成免疫结合反应。

去除封板，弃净孔内液体，洗涤液加满每孔静置 30s，洗板 5 次后彻底拍干。

加入显色 A、B 液混匀，37℃避光显色 14min。

加入终止液终止显色，混匀反应体系。

450nm 酶标仪读取 OD 值，标准曲线法计算 PDIA3 样本浓度。
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