人蛋白二硫化物异构酶前体(PDI)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA技术原理，预先在微孔板上包被人蛋白二硫化物异构酶前体特异性抗体，加入待测样本后，样本中的PDI前体抗原与固相抗体特异性结合，洗除未结合杂质后加入酶标记检测抗体，形成固相夹心免疫复合物，随后加入底物液进行显色反应，酶促反应生成的有色产物浓度与样本中PDI前体含量正相关，通过检测吸光度值即可完成定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人蛋白二硫化物异构酶前体(PDI)ELISA试剂盒

英文名称：PDI  Elisa Kit
货号：Y-E961

规格：48T/96T

灵敏度：≤0.22ng/mL

检测范围：0.47ng/mL - 30ng/mL

反应时间：总时长 110min（样本 60min，二抗 30min，显色 20min）

显色系统：常规单组份 TMB 显色

检测波长：450nm+630nm 双波长校正

特异性：特异性结合 PDI 未剪切前体蛋白，不识别成熟活化 PDI

重复性：板内 CV＜7.2%，板间 CV＜9.0%

注意事项：避免样本高温灭活，4℃短期保存，长期分装冻存
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂室温平衡 25min，按比例稀释浓缩洗涤液，梯度制备 PDI 前体标准品，标记酶标板各孔用途。

标准孔、样本孔、空白孔依次加入对应液体，每孔添加酶标记工作液，封板膜封口。

37℃避光孵育 50min，进行一步夹心免疫结合。

弃去反应液，洗板液浸泡每孔 25s，洗板 4 次，倒扣拍干板条水分。

加入显色底物，轻微震荡酶标板，37℃避光显色 13min。

加入终止液停止显色反应，混匀板面液体。

酶标仪 450nm 检测吸光度，拟合曲线计算样本 PDI 前体含量。
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