本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，微孔板固相表面固定人蛋白激酶A特异性捕获抗体，加入待测样本与标准品，样本中的PKA抗原与固相抗体特异性免疫结合，孵育洗涤后加入酶标检测抗体形成夹心复合物，再次洗涤后加入显色底物，经酶催化产生特异性显色反应，吸光度数值随样本中PKA浓度升高而递增，对照标准曲线可精准测定样本中目标蛋白含量。
基本参数：
产品名称：人蛋白激酶A(PKA)ELISA试剂盒
英文名称：PKA Elisa Kit
货号：Y-E929
规格：48T/96T
灵敏度：≤0.09U/mg
检测范围：0.18U/mg - 12U/mg
反应时间：总时长 125min（样本 70min，酶标二抗 35min，显色 20min）
显色系统：HRP-TMB 显色系统
检测波长：450nm
特异性：识别 PKA 催化亚基与调节亚基复合物，无其他激酶交叉
重复性：板内 CV＜6.0%，板间 CV＜7.6%
注意事项：裂解液提取蛋白样本需添加蛋白酶抑制剂，防止靶蛋白降解
关键注意事项：
本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。
全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。
移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。
孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。
洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。
终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。
终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。
实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。
不同批次试剂盒组分不可混用。
试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。
实验步骤如下：
试剂盒室温放置 35min，稀释洗涤液，稀释 PKA 标准品成梯度浓度，酶标板分孔标记。
各孔添加标准品、预处理待测样本、空白稀释液，加入酶标抗体工作液，密封封板。
37℃避光孵育 75min，充分结合包被抗体、样本抗原与酶标抗体。
弃液后洗涤液浸泡每孔 35s，洗板 5 次，拍干孔内残留液体。
加入显色双底物，混匀后 37℃避光显色 22min。
滴加终止液终止反应，水平摇匀酶标板。
15min 内 450nm 测 OD 值，标准曲线换算 PKA 含量。
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