本试剂盒依托双抗体夹心ELISA检测原理,微孔板包被人UGT2B4特异性捕获抗体,可特异性识别样本中的UGT2B4蛋白抗原,加入待测样本与系列标准品完成抗原抗体结合后,洗板清除游离杂质,加入酶标记特异性检测抗体构建免疫夹心复合物,经底物显色、终止反应、吸光度检测后,对照标准曲线精准定量样本中人UGT2B4的蛋白含量。
基本参数:

产品名称:人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)ELISA试剂盒
英文名称:UGT2B4 ELISA Kit
货号:Y-E2606
规格:48T/96T
灵敏度:最低检出 0.08ng/mL
检测范围:0.25ng/mL~16ng/mL
反应时间:37℃样本 84min,酶复合物 45min,显色 18min
显色系统:单组分稳定显色底物,2~8℃避光
检测波长:450nm 为主检测波长,570nm 校正背景
特异性:严格靶向 UGT2B4,UGT2 家族其他亚型交叉反应<5%
重复性:板内 CV<5.9%,板间 CV<9.9%
注意事项:肝组织裂解样本需添加蛋白酶抑制剂,防止 UGT 酶蛋白降解
通用注意事项:

样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下:

试剂盒室温平衡 30min,稀释浓缩洗涤液,拆分酶标板,预留微孔板条密封置于 2~8℃环境避光保存。
孔位分组上样,梯度标准品、细胞待测样本每孔添加 50μL,空白孔不添加试剂。
直接向各加样孔加入一步法酶标记工作液 100μL,震荡混匀后覆膜封板。
37℃恒温孵育 70min,全程保持酶标板水平放置。
撕去封板膜,倾倒孔内废液,洗涤液注满每孔浸泡 35s 后彻底拍干,重复洗板 5 次。
在避光环境下依次加入显色剂 A 液、B 液各 50μL,轻微摇匀,37℃避光显色 16min。
快速加入终止液 50μL 终止酶促显色反应,混匀后 8min 内使用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度,拟合标准曲线计算样本 UGT2B4 含量。
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