人波形蛋白(VIM)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法定量检测样本中人波形蛋白(VIM)含量。酶标板预包被VIM特异性捕获抗体，加入标准品与待测样本孵育，样本中的VIM抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质后，加入生物素化检测抗体与酶标链霉亲和素，形成稳定夹心免疫复合物，底物显色深浅与VIM浓度成正比，对照标准曲线可精准测定样本中波形蛋白的含量。
产品参数：

‌灵敏度：0.06ng/mL

检测范围：0.12ng/mL～7.7ng/mL

反应时间：夹心法孵育 63min，二抗 36min，显色 18min

显色系统：单组份避光 TMB 显色液

检测波长：450nm/630nm

特异性：抗波形蛋白特异性单抗，角蛋白、结蛋白等中间丝蛋白无交叉

重复性：板内 CV＜5.6%，板间 CV＜8.6%

注意事项：组织样本裂解避免高温煮沸，防止波形蛋白降解断裂
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

组织上清样本、标准品、酶标记抗体同步加至板孔，密封 37℃孵育 60min，洗板 4 次。

洗涤液注满微孔静置 30s 弃液，重复洗涤后拍干孔内液体。

加入显色 A、B 混合液避光显色 17min。

滴加终止液终止反应，混匀酶标板内体系。

酶标仪 450nm 测定 OD 吸光值并记录。

绘制标准曲线，计算浓度对应关系。

换算样本波形蛋白 VIM 表达浓度，完成数据归档。