本试剂盒采用经典双抗体夹心ELISA原理，在酶标板微孔内包被军团菌特异性捕获抗体，加入待测样本和梯度标准品，样本中的军团菌抗原可与包被抗体特异性结合，洗去未结合杂质后，加入酶标记的军团菌检测抗体，形成稳定的夹心式免疫复合物，后续通过底物催化显色、终止反应，检测各孔吸光度数值，依托标准曲线计算出样本中军团菌抗原的含量。
基本参数：
产品名称：人军团菌抗原(LP Ag)ELISA试剂盒
英文名称：LP Ag Elisa Kit
货号：Y-E583
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测 0.05ng/mL 军团菌抗原
检测范围：0.1–8ng/mL
反应时间：样本结合 60min，酶标抗体 40min，显色 10min，整体 95min
保存条件：全套试剂 2～8℃冷藏，洗涤浓缩液室温存放，结冰失效
显色系统：TMB 显色液 A、B 液混合使用
检测波长：450/630nm 双波长
标准曲线绘制：7 个浓度梯度标准品，Logistic 拟合曲线定量样本抗原含量
注意事项：尿液、肺泡灌洗液样本需过滤后上样；浑浊样本必须离心澄清；加样枪头一次性更换防交叉污染
储存与有效期：
未开封整套试剂盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷冻；有效期 12 个月。
开封后保存
剩余酶标板条：自封袋密封，内置干燥剂 2～8℃避光；1 个月内用完。
HRP 酶结合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。
浓缩洗涤液：2～30℃常温保存，结晶温水溶解不影响效果。
复溶后标准品：分装 - 20℃冻存，避免反复冻融，1 个月内使用。
过期试剂禁止使用。
实验步骤如下：
样本前处理
痰液样本加入等量样本裂解液震荡混匀，静置 15min 离心取上清；血清、尿液样本直接离心去除杂质，上清用于检测。
试剂准备回温
酶标板条拆封后置于室温，其余试剂全部室温平衡 35min，按比例稀释浓缩洗涤液，摇晃混匀。
抗原标准品稀释
军团菌抗原标准品溶解后梯度稀释 8 个浓度梯度，每孔加入梯度标准品 50μL，空白孔只加稀释缓冲液。
抗原抗体共孵育
待测样本 50μL 加入微孔，再加入生物素化抗军团菌抗原抗体 50μL，密封酶标板，37℃孵育 65min。
反复洗板去除游离物
甩掉孔内液体，洗涤液加满每孔，浸泡 45s，拍干，连续洗板 4 次，吸水纸彻底吸干板条水分。
酶促显色反应
每孔加入链霉亲和素 - HRP 溶液 100μL，37℃孵育 25min；洗板 5 次后添加 TMB 显色液 100μL，避光显色 16min。
终止显色定量
滴加终止液终止反应，450nm 测定 OD 值，绘制标准曲线定量样本内军团菌抗原浓度，超标样本稀释重测。
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