人抗EB病毒抗体(EBV)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附检测原理，酶标板微孔包被纯化的EB病毒特异性抗原，待测样本中的抗EB病毒抗体与固相抗原特异性结合，洗涤去除未结合的杂蛋白与杂质，加入酶标记抗人免疫球蛋白二抗，孵育结合后加入显色底物催化显色，终止反应后检测吸光度，依据标准曲线定量检测样本中抗EB病毒抗体的含量。
基本参数‌：

产品名称：人抗EB病毒抗体(EBV)ELISA试剂盒

英文名称：EBV ELISA Kit
货号：Y-E2723

规格：48T/96T

灵敏度：临界 OD 0.16，可检出早期低滴度抗体

检测范围：定性阴阳性，定量 0.4–25COI

反应时间：样本孵育 85min，酶结合物 50min，显色 17min，全程 152min

保存条件：未开封 2–8℃；开封后试剂 1 个月内用完，避光保存

显色系统：HRP 介导 TMB 显色

检测波长：450nm

标准曲线绘制：校准品定标 COI 值，以阴性对照均值计算临界值判读阴阳

注意事项：EBV 既往感染与现症感染需结合指标综合判断；样本不可高温灭活
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

血清样本处理

分离血清后无溶血污染，样本可 4℃存放 1 天，反复冻融不超过 2 次，复融后涡旋混匀。

试剂回温稀释

酶标板条拆封，所有试剂室温平衡 30min，稀释浓缩洗涤液配制成工作洗涤液。

标准品配液加孔

EBV 抗体标准品复溶倍比稀释 6 个梯度，每孔添加 50μL 标准品溶液，设置阴性对照。

样本共孵育反应

待测样本 50μL 入孔，加入酶标记 EBV 抗原液 50μL，封板 37℃孵育 60min。

微孔洗涤步骤

倒掉孔内液体，洗涤液浸泡 30s 拍干，重复洗板 4 次，吸水纸压干板条。

避光底物显色

每孔加入显色液 100μL，37℃避光显色 12min，统一时间终止。

终止判读结果

加入终止液，450nm 测 OD 值，依据临界值判定 EBV 抗体阴阳性及滴度。
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