人高尔基蛋白73(GP-73)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板固相包被人高尔基蛋白73特异性捕获抗体，样本中的GP-73抗原与固相抗体特异性结合，再加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体形成夹心免疫复合物，经充分洗涤纯化后进行底物显色反应，吸光度值与样本中GP-73含量呈正相关，依托标准曲线可精准定量检测人高尔基蛋白73的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出 2ng/mL

检测范围：6.4ng/mL～204.8ng/mL

反应时间：室温孵育 85min，二抗 65min，显色 20min

显色系统：单液 TMB 显色体系

检测波长：450nm，参考 620nm

特异性：特异性识别高尔基体 GP73 蛋白，与常规肝损伤标志物无交叉干扰

重复性：批内 CV＜9%，批间 CV＜11.3%

注意事项：重度溶血样本直接剔除；试剂盒开封后防潮防挥发，1 个月内用完
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温平衡 35min，配制梯度标准品稀释液，酶标板设定空白、标准、样本孔，每孔上样 50μL，空白孔无添加试剂。

每孔添加一步法酶结合工作液 100μL，封板密封，上下轻晃酶标板混匀体系。

37℃避光孵育 70min，孵育环境温度稳定无偏差。

倾倒孔内反应废液，洗板液浸泡微孔 25s，洗板 6 次，倒扣板条用吸水纸拍干水分。

依次加入显色 A 液、B 液各 50μL，避光 37℃显色 13min。

快速加入终止液 50μL 混匀终止酶促反应。

酶标仪 450nm 波长检测吸光度，对照标准曲线计算高尔基蛋白 73 浓度。