本试剂盒运用间接ELISA检测原理，酶标板固相包被斑疹伤寒特异性抗原，加入待测样本和标准品，样本中的抗斑疹伤寒抗体与固相抗原特异性结合，洗板去除未结合组分，加入酶标记抗人二抗发生特异性结合反应，经底物显色、终止反应后检测吸光度，依据标准曲线精准定量样本中抗斑疹伤寒抗体水平。
基本参数：
产品名称：人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒
英文名称：anti-typhus antibody Elisa Kit
货号：Y-E555
规格：48T/96T
灵敏度：最低滴度 1:25
检测范围：定性判定阴阳性，定量 0.6–30AU/mL
反应时间：样本孵育 95min，酶结合物 60min，显色 18min，总 173min
保存条件：2～8℃避光密封保存，拆分板条务必防潮
显色系统：HRP-TMB 显色体系
检测波长：450nm
标准曲线绘制：阳性参考品倍比稀释绘制曲线判定抗体滴度
注意事项：恙虫病血清存在交叉干扰；终止液含强酸，操作做好防护
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
血清样本处理
静脉血分离血清，无细菌污染，4℃短期存放不超过 3 天，长期分装冷冻保存。
试剂盒试剂预处理
全部试剂室温放置 31min，浓缩洗涤液按比例蒸馏水稀释混匀备用。
标准品加孔稀释
斑疹伤寒抗体标准品复溶倍比稀释 6 梯度，每孔加入 50μL 标准品溶液，设置阴性对照孔。
一步法孵育反应
待测样本 50μL，加入酶标记斑疹伤寒抗原液 50μL，密封酶标板，37℃孵育 50min。
微孔洗涤流程
弃液后洗涤液浸泡 30s 拍干，重复洗板 5 次，每次拍干板条多余液体。
底物显色反应
每孔加入显色底物液 100μL，避光 37℃显色 12min。
终止结果判定
终止液终止酶反应，450nm 测定 OD 值，对照临界值判定抗体阴阳性。
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