人肌腱蛋白R(TN-R)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA技术原理，将TN-R特异性捕获抗体包被于微孔板固相表面，加入待测样本与梯度标准品，样本中的TN-R抗原与固相抗体特异性结合，随后加入酶标记TN-R检测抗体形成夹心复合物，经洗涤去除未结合的游离蛋白与抗体后，添加底物液进行显色反应，显色深浅对应样本中TN-R的含量高低，通过酶标仪测定吸光度，结合标准曲线可精准定量人样本中肌腱蛋白R的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出量 0.22ng/mL

检测范围：0.45ng/mL~12ng/mL

反应时间：室温封闭 30min；样本孵育 80min；酶标液 50min；显色 18min

保存条件：原装试剂盒 2~8℃；浓缩洗涤液室温短期存放，其余试剂必须冷藏

显色系统：可溶性 TMB 显色液，酸性终止液终止反应

检测波长：450nm

标准曲线绘制：以标准品浓度对数为 X 轴，OD 值为 Y 轴拟合标准曲线，自动换算样本含量

注意事项：避免微孔板干涸；所有试剂使用前需恢复至室温 25℃左右再开盖使用
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

样本处理：组织样本经研磨、裂解、离心取上清，血清样本常温融化后用稀释液 1:10 稀释，充分吹打混匀，剔除浑浊变质样本。

酶标板点位加样：取出 TN-R 预包被板，设置复孔与空白对照，待测孔加入稀释上清 / 血清 100μL，标准孔加入梯度标准品 100μL，空白孔加等量稀释液。

同步加入酶标记二抗：无需预孵育洗板，每孔加入酶结合物工作液 50μL，缓慢晃动酶标板使两相液体混匀。

封板恒温孵育：封板膜密封微孔板，置于 37℃孵育箱避光孵育 70min，期间不可开盖。

多轮洗板操作：弃液后每孔加满洗涤液，静置 30s 拍干，循环洗板 5 次，最后一次充分拍干微孔内液体。

TMB 底物避光显色：每孔加入显色底物混合液 100μL，37℃避光反应 16min，依据标准品蓝色深浅判断显色正常。

终止吸光值测定：加入终止液终止反应，混匀后 10min 内 450nm 测 OD 值，绘制标准曲线定量 TN-R 表达量。