人肌养蛋白(dystrophin)ELISA试剂盒

本试剂盒采用经典双抗体夹心ELISA检测方法，固相载体包被dystrophin特异性抗体，待测样本中的肌养蛋白与固相捕获抗体发生特异性免疫结合，随后加入酶标记检测抗体形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗涤去除多余游离物质后，加入底物进行酶促显色反应，产物吸光度值与样本中肌养蛋白浓度呈正相关，依据标准曲线可实现精准定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：≤0.25ng/mL

检测范围：0.5ng/mL~16ng/mL

反应时间：封闭 25min；样本孵育 90min；酶标二抗 50min；显色 17min

保存条件：未开封 2~8℃可存 6 个月；开封后试剂 2~8℃1 个月内使用完毕

显色系统：即用型 TMB 显色底物

检测波长：450nm

标准曲线绘制：7 个梯度标准品，采用非线性四参数拟合标准曲线方程

注意事项：组织匀浆样本需添加蛋白酶抑制剂，防止靶蛋白降解
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

样本处理：骨骼肌组织充分研磨裂解，高速离心取上清液，用配套稀释液稀释待测上清。

微孔板加样：dystrophin 包被酶标板，各孔分别添加标准品、稀释样本、空白稀释液各 100μL。

共加酶标记抗体：不洗板直接加入酶结合工作液 55μL，轻晃混匀。

密封孵育：封板膜密封，37℃避光孵育 68min。

洗板除游离蛋白：连续洗板 5 次，每轮浸泡 32s，吸水纸吸干残留液体。

TMB 显色：加入显色 A、B 液各 50μL，避光显色 18min。

终止检测：加终止液终止反应，450nm 检测吸光度，定量肌养蛋白含量。