人抗磷脂抗体(Apl/APA)ELISA试剂盒

本试剂盒运用间接酶联免疫吸附检测原理，微孔板预包被纯化的人磷脂抗原，待测样本中的抗磷脂抗体可与固相磷脂抗原发生特异性免疫结合，孵育反应后洗板去除未结合杂质；随后加入酶标记特异性二抗，与已结合的抗磷脂抗体精准结合，形成固相抗原-目标抗体-酶标二抗的免疫复合物；经再次洗板后加入显色底物进行酶促显色反应，终止反应后检测吸光度，样本吸光度数值与抗磷脂抗体含量正相关，通过标准曲线可定量测定样本中Apl/APA的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人抗磷脂抗体(Apl/APA)ELISA试剂盒

英文名称：Apl/APA  Elisa Kit
货号：Y-E465

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测 0.25RU/mL

检测范围：0.5RU/mL - 20RU/mL

反应时间：温育分两步各 45min，显色 10min，总耗时 100min

保存条件：整套试剂 2~8℃避光，浓缩洗涤液 4℃易结晶，使用前 37℃水浴融化混匀

显色系统：HRP 标记二抗介导 TMB 显色

检测波长：450nm，建议 600nm 做空白校正

标准曲线绘制：8 个梯度标准品，四参数拟合，自动扣除空白孔 OD 值后计算曲线

注意事项：溶血样本会造成假阳性；微孔板不可重复使用，剩余板条铝箔袋密封防潮
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒所有组分室温回温 20min，取出微孔板，规划实验排布，标记各类孔位，多余板条密封冷藏保存。

待测血清样本稀释处理后，样本孔加样 50μL；阴性、阳性对照分别加对应试剂 50μL，空白孔不添加试剂。

直接向所有非空白孔加入酶标记抗原工作液 50μL，封板膜严实密封酶标板，低速震荡混匀。

37℃恒温培养箱孵育 50min，防止板内液体蒸发影响实验结果。

去除封板膜，弃液洗板：每孔灌满洗涤液，浸泡 35s 倒掉，循环洗板 5 次，最后一次在吸水纸上用力拍干。

每孔先后加入显色 A 液、B 液各 50μL，避光混匀，37℃条件下避光反应 10min。

滴加终止液 50μL 终止酶促反应，混匀后立即用酶标仪 450nm 测 OD 值，对照标准曲线换算抗体含量。
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