人己糖激酶3(HK3)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板固相包被HK3特异性捕获抗体，加入待测样本后，样本中的己糖激酶3与固相抗体特异性结合，随后加入酶标记HK3检测抗体形成固相抗体-抗原-酶标抗体夹心结构，经洗涤去除未结合组分后，底物在酶的催化下显色，显色深浅与样本中HK3浓度呈正相关，通过标准曲线计算可实现样本HK3的精准定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：≤0.18ng/mL

检测范围：0.38ng/mL~12.16ng/mL

反应时间：样本孵育 90min；二抗 45min；显色 19min

保存条件：试剂盒 2~8℃；显色液避光存放，见光氧化变蓝则失效废弃

显色系统：双组分 TMB 显色体系

检测波长：450nm

标准曲线绘制：6 个梯度标准品线性回归绘制标准曲线，稀释倍数纳入结果计算

注意事项：全程佩戴手套口罩操作，避免人体蛋白带入微孔板造成非特异性吸附
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

样本处理：细胞裂解上清、组织匀浆稀释后离心去除沉淀，冰上低温保存。

微孔板加样：HK3 包被 96 孔板，各孔分别添加标准品、稀释待测样本、空白稀释液 100μL。

共加酶偶联抗体：无需前置洗涤，加入酶标记抗体 50μL，封板摇匀。

恒温孵育反应：37℃避光孵育 69min。

洗板操作：洗涤缓冲液洗板 4 次，每次浸泡 30s，吸干残留洗液。

显色反应：加入显色 A、B 液各 50μL，避光显色 18min。

终止上机测定：终止液终止酶促反应，450nm 检测 OD 值，计算 HK3 蛋白浓度。