人甲胺喋呤(MTX)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争法ELISA检测原理，微孔板预先包被甲胺喋呤特异性抗原，检测时将待测样本与定量的酶标记甲胺喋呤一同加入微孔中，样本中的甲胺喋呤与酶标记甲胺喋呤会竞争性结合微孔板上的固相抗体；孵育反应结束后洗涤去除未结合的游离物质，加入底物液发生酶促显色反应，显色深浅与样本中甲胺喋呤的含量呈负相关，即样本中甲胺喋呤浓度越高，竞争性结合的固相位点越多，酶标记物结合量越少，最终吸光度值越低，结合标准曲线可定量测定样本中甲胺喋呤含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 0.08nmol/L

检测范围：0.2~12.8nmol/L

反应时间：竞争法一抗孵育 45min，二抗结合 30min，显色终止 10min，全程 90min

保存条件：未拆封 2~8℃储存；浓缩洗涤液室温存放即可，其余试剂严禁冷冻

显色系统：双组分 A+B TMB 显色体系

检测波长：单波长 450nm 直接读数

标准曲线绘制：采用半对数坐标绘图，X 轴标准品浓度对数，Y 轴抑制率 OD 值，线性回归拟合曲线计算样本含量

注意事项：用药后血浆样本需低温分离；试剂使用前回温至室温；终止液为稀硫酸，避免皮肤黏膜接触
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

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实验操作流程：

将试剂盒所有组分放置室温环境复温 25min，取出所需酶标板，预留标准品孔、待测样品孔、空白孔，各孔添加对应稀释样品 100μL，空白孔补加等量稀释液。

无需洗板，直接于每孔添加酶标记抗原工作液 60μL，低速摇晃酶标板 15s 混匀，覆膜封闭板口。

置于 37℃温箱避光孵育 55min，全程杜绝阳光直射干扰抗原抗体特异性结合。

揭开封板膜，倾倒孔中废液，每孔注满洗涤液浸泡 40s 后甩干，循环洗板 4 次，最后一次彻底拍净孔内残液。

每孔先后加入显色液 A、显色液 B 各 50μL，避光 37℃恒温显色 12min，观察孔内蓝色渐变程度。

每孔滴加终止液 50μL，水平轻晃酶标板使液体混合均匀，显色由蓝变黄即代表反应终止。

立即使用酶标仪在 450nm 检测各孔光密度值，依托标准品浓度梯度绘制曲线，换算样本 MTX 浓度。