本试剂盒依托间接ELISA检测原理,微孔板固相包被纯化的鼠源免疫球蛋白抗原,待测样本中的人抗鼠抗体(HAMA)可与固相鼠抗原特异性结合,孵育反应后洗去未结合的游离成分;加入辣根过氧化物酶标记的抗人二抗,与固相上的HAMA抗体特异性结合,形成稳定免疫复合物;经洗涤后加入底物显色液显色,显色深浅与样本中HAMA含量正相关,终止显色后检测吸光度,通过标准曲线定量测定目标抗体浓度。
基本参数:

产品名称:人抗鼠抗体(HAMA)ELISA试剂盒
英文名称:HAMA ELISA Kit
货号:Y-E2666
规格:48T/96T
灵敏度:0.2ng/mL
检测范围:0.4ng/mL - 12.8ng/mL
反应时间:样本孵育 56min,酶标液 32min,显色 11min
保存条件:2~8℃避光,浓缩洗涤液低温易结晶,37℃水浴溶解后正常使用
显色系统:HRP 催化 TMB 显色
检测波长:450nm
标准曲线绘制:线性回归法绘制标准曲线,适用于免疫治疗前干扰抗体筛查
注意事项:既往使用鼠源单抗药物患者极易检出阳性,会干扰后续免疫试剂盒检测结果
关键注意事项:

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书,不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存,未用完的试剂需密封后放回规定温度(通常2-8℃或-20℃)
避免试剂污染,不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖,防止出现假阳性结果
显色过程需避光,避免阳光直射影响结果
实验步骤如下:

试剂盒室温平衡 21min,取出微孔反应板,按需拆分板条,标注各类孔位组别与编号。
待测稀释样本每孔加样 92μL,阴性对照、阳性对照孔加入对应对照液 92μL,空白孔无液体添加。
直接向全部非空白孔加入酶标记抗原工作液 92μL,封板膜密封,横向晃动酶标板混匀。
37℃恒温培养箱孵育 44min,孵育环境温度稳定无明显波动。
揭膜倒掉废液,洗涤液加满每孔浸泡 23s 弃除,循环洗板 4 次,吸水纸吸干微孔内部残留液体。
分别向每孔添加显色 A 液、B 液各 50μL,避光混匀,室温避光显色 18min。
加入终止液 50μL 终止酶促反应,混匀后 450nm 检测吸光值,绘制标准曲线计算 HAMA 抗体浓度。
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